Альтернативная оксидаза

Поделись знанием:
Перейти к: навигация, поиск
Альтернативная оксидаза
Идентификаторы
Символ

AOX

Pfam

[pfam.xfam.org/family?acc=PF01786 PF01786]

InterPro

[www.ebi.ac.uk/interpro/entry/IPR002680 IPR002680]

OPM superfamily

[opm.phar.umich.edu/families.php?superfamily=471 471]

OPM protein

[opm.phar.umich.edu/protein.php?search=3w54 3w54]

Альтернати́вная оксида́за (AO) — фермент, обеспечивающий альтернативный транспорт электронов в митохондриях всех семенных растений, грибов, а также водорослей, некоторых простейших и ряда малоподвижных или прикреплённых животных[1][2][3]. Гомологи этого белка были обнаружены в геномах многих бактерий[4][5]. Биоинформатическими методами удалось выявить альтернативную оксидазу во всех царствах, кроме археобактерий[1].

Альтернативная оксидаза прямо восстанавливает O2 до H2O, окисляя пул убихинонов, и рассеивает энергию в виде тепла. Однако, при таком механизме по крайней мере два из трёх пунктов сопряжения теряются, и потенциально генерация градиента протонов возможна только на комплексе I при окислении НАДН, что значительно снижает конечный выход АТФ[6].





История открытия

Ещё в XIX веке ботаники описали явление, которое впоследствии назвали термогенезом ароидных растений: при цветении некоторых видов температура цветка резко повышалась, иногда превышая температуру окружающей среды на десятки градусов. Особенно ярко этот феномен выражен при цветении таких растений, как аронник пятнистый (Arum maculatum), Symplocarpus foetidus[en], Sauromatum guttatum[en], филодендрон двоякоперистый (Philodendron selloum). Так, температура цветка лилии Arum italicum может достигать 51 °С при температуре воздуха 15 °С[6]. Приспособительное значение этого явления состоит в усилении испарения пахучих веществ и привлечении насекомых-опылителей. При исследовании этого феномена оказалось, что повышение температуры сопровождается вспышкой дыхательной активности, при этом дыхание не подавлялось цианидом и CO — классическими ингибиторами дыхания животных. Так было открыто цианидрезистентное дыхание растений. Целенаправленное изучение этого явления привело к открытию альтернативной оксидазы и связанного с ней альтернативного пути переноса электронов[7].

Структура

Альтернативная оксидаза — убихинон-кислород-оксидоредуктаза — представляет собой один полипептид с массой около 32 кДа. Он прочно закреплён на внутренней мембране митохондрий со стороны матрикса[8]. Его синтез у растений кодируется ядерным геном Aox1. У растений Sauromatum guttatum, сои и арабидопсиса обнаружено три ядерных гена, кодирующих изоформы АО, экспрессия которых зависит от типа ткани[6].

В реакционном центре фермент содержит два атома железа, связанных остатками четырёх глутаматов, одним аспартатом и аспарагином, а так же двумя гистидинами[9]. Проведённое методом ЭПР исследование альтернативной оксидазы AOX1a из Arabidopsis thaliana показало, что фермент действительно содержит связанный гидроксо-мостиками двуядерный центр из двух атомов железа смешанной валентности (Fe(II)/Fe(III))[10]. Точный механизм восстановления кислорода неизвестен, но предполагают, что имеет место каталитический цикл с участием двухядерного железного центра и по крайней мере одного образованного белком свободного радикала, который, вероятно, формируется на тирозиновом остатке[11].

Функции

Растения

Физиологическая роль АО понятна только в случае термогенеза ароидных. В других случаях выгода получаемая растением от такого рода фермента не всегда окончательно ясна. На экспрессию гена альтернативной оксидазы Aox влияют такие стрессовые факторы, как холод, активные формы кислорода и поражение патогеном, а также факторы, уменьшающие поток электронов через цитохромный путь дыхания (цианид)[12][13].

Поскольку свыше 2500 видов растений, принадлежащих к разным семействам (клевер ползучий (Trifolium repens), лядвенец рогатый (Lotus corniculatus), горошек (Vicia) sp.)[6], в естественных условиях накапливают цианогенные гликозиды[en], распад которых сопровождается образованием HCN, то полагают, что АО — это возникший в ходе эволюции способ, позволяющий поддерживать дыхание при подавлении его цианидом. В свою очередь цианид продуцируют некоторые патогенные грибы и бактерии. Однако это не объясняет, почему АО есть у всех растений и какую роль она играет в нормальном функционировании клетки.

Согласно современным представлениям, альтернативное дыхание — это способ поддержания баланса между углеводным метаболизмом и скоростью электронного транспорта. Известно, что ферменты ЦТК аллостерически регулируются[en] через соотношения НАДН/НАД+ и АТФ/АДФ. При высоком уровне цитоплазматического НАДН и АТФ работа ЦТК будет блокирована, что может происходить при активной работе хлоропластов в условиях яркого освещения. Функция АО может заключаться в быстром окислении НАДН в дыхательной цепи. В результате будет снят тормоз с ЦТК, интермедиаты которого активно используются в различных биосинтетических процессах[6].

Вторая важная функция АО заключается в защите клетки от окислительного стресса. Митохондрия — место образования супероксидрадикала и перекиси водорода. Интенсивному образованию и накоплению этих опасных веществ способствует торможение электронного транспорта и «перевосстановление» цепи при высоких значениях протонного градиента. АО ведёт к увеличению скорости транспорта и «разгрузке» цепи за счёт сброса электронов на кислород с образованием безопасной воды. Существуют убедительные доказательства, что альтернативная оксидаза препятствует генерации активных форм кислорода[14]. Так, перекись водорода является вторичным мессенджером в сигнальном каскаде, приводящем к экспресси гена Aox1 и синтезу АО de novo[en][6].

Простейшие

Обитающий в кровотоке протозойный паразит Trypanosoma brucei[en], вызывающий сонную болезнь, дышит, используя исключительно альтернативный транспорт электронов[15][16]. Такое серьёзное отличие в метаболизме между паразитом и его хозяином-человеком сделало альтернативную оксидазу T. brucei весьма привлекательной мишенью для разработки лекарств[17][18]. Так, один из известных ингибиторов альтернативной оксидазы — антибиотик аскофуранон[en] — подавляет работу этого фермента у T. brucei и может вылечить инфекцию у мышей[19][20].

Грибы

У грибов способность к альтернативному дыханию помогает преодолеть ингибирование частей электрон транспортной цепи и играет важную роль в устойчивости грибов к фунгицидам. Это хорошо видно на примере таких препаратов, как стробилурины азоксистробин, пикоксистробин и флуоксастробин, которые действуют на комплекс III[21]. Однако, поскольку альтернативный путь дыхания производит меньше АТФ, эти фунгициды всё равно эффективны, так как предотвращают прорастание спор, которое является очень энергозатратным процессом[22].

Животные

Длительное время считалось, что альтернативная оксидаза присутствует исключительно в митохондриях грибов, растений и простейших. Тем не менее, начиная с 2004 года, благодаря методам полногеномного секвенирования в геномах ряда беспозвоночных удалось обнаружить гены альтернативной оксидазы[2]. На сегодняшний день альтернативная оксидаза обнаружена в десяти типах животных таких как губки, пластинчатые, стрекающие (коралловые полипы и гидроидные), моллюски (брюхоногие и двустворчатые), кольчатые черви, нематоды, иглокожие, полухордовые и хордовые (ланцетники и оболочники). Есть также сообщения о наличии цианидрезистентного дыхания у сипункулид и двупарноногих многоножек. Ген АО из оболочника Ciona intestinalis был перенесён в культуру клеток почки человека. Было показано, что альтернативная оксидаза экспрессировалась и локализовалась в митохондриях, а клетки обрели устойчивость к цианиду[1].

Альтернативная оксидаза животных имеет уникальный C-концевой мотив, характерный только для животных. Также у неё отсутствуют N-концевые остатки цистеина, которые важны для регуляции этого фермента у растений[1].

Существует гипотеза, объясняющая почему большинство позвоночных а также членистоногих утратили АО несмотря на очевидные преимущества, которые она даёт. Большинство видов, у которых была обнаружена АО, относятся к пелагическим или прикреплённым организмам, а значит их митохондрии должны регулярно подвергаться энергетическому стрессу, которого они не могут избежать, например: фотосинтез у растений, токсичные ксенобиотики у микроорганизмов или локальные флуктуации морской среды (температура, уровень кислорода). В таких условиях АО помогает малоподвижным организмам выжить и справится с нагрузкой, однако она практически бесполезна для активный быстро движущихся организмов и поэтому, вероятно, было утрачена из-за отсутствия давления естественного отбора[23].

Регуляция

Альтернативная оксидаза может существовать в форме мономера и димера. В структуре белка есть два остатка цистеина, при окислении которых образуется дисульфидная связь, ковалентно связывающая два мономера. В условиях сильного освещения пул НАДФН посредством митохондриальной НАДФН-тиоредоксинредуктазы восстанавливает белок тиоредоксин, который, в свою очередь, восстанавливает дисульфидную связь в димере АО. Высвобождение мономера АО сопровождается повышением её активности в несколько раз[24][25]. Фермент аллостерически активируется пируватом[26].

Специфическим ингибитором АО считаются соли гидроксамовых кислот (салицилгидроксамовая кислота[en]) и n-пропилгаллат[6].

Альтернативная оксидаза в млекопитающих

В 2013 году поступило сообщение о создании линии генномодифицированной мышей со встроенным геном АО из Ciona intestinalis. Фермент с разной интенсивностью экспрессировался во всех тканях (сильнее всего в мозге и поджелудочной железе). Внедрение альтернативной оксидазы не вызвало каких либо отклонений в физиологии, поведении или развитии мышей. Мыши этой линии имеют повышенную устойчивость к действию цианида, а также некоторых других веществ, таких как антимицин, блокирующих дыхательные комплексы. Кроме того у этих мышей наблюдалось пониженное образование активных форм кислорода в митохондриях[23].

См. также

Напишите отзыв о статье "Альтернативная оксидаза"

Примечания

  1. ↑ 1 2 3 4 Allison E. McDonald, Greg C. Vanlerberghe, James F. Staples (2009). «Alternative oxidase in animals: unique characteristics and taxonomic distribution». Journal of Experimental Biology 212: 2627-2634. DOI:10.1242/jeb.032151.
  2. ↑ 1 2 McDonald A, Vanlerberghe G (2004). «Branched mitochondrial electron transport in the Animalia: presence of alternative oxidase in several animal phyla». IUBMB Life 56 (6): 333–41. DOI:10.1080/1521-6540400000876. PMID 15370881.
  3. ↑ Sluse FE, Jarmuszkiewicz W (1998). «Alternative oxidase in the branched mitochondrial respiratory network: an overview on structure, function, regulation, and role». Braz. J. Med. Biol. Res. 31 (6): 733–47. DOI:10.1590/S0100-879X1998000600003. PMID 9698817.
  4. ↑ McDonald AE, Amirsadeghi S, Vanlerberghe GC (2003). «Prokaryotic orthologues of mitochondrial alternative oxidase and plastid terminal oxidase». Plant Mol. Biol. 53 (6): 865–76. DOI:10.1023/B:PLAN.0000023669.79465.d2. PMID 15082931.
  5. ↑ Atteia A, van Lis R, van Hellemond JJ, Tielens AG, Martin W, Henze K (2004). «Identification of prokaryotic homologues indicates an endosymbiotic origin for the alternative oxidases of mitochondria (AOX) and chloroplasts (PTOX)». Gene 330: 143–8. DOI:10.1016/j.gene.2004.01.015. PMID 15087133.
  6. ↑ 1 2 3 4 5 6 7 Ермаков, 2005, с. 252—268.
  7. ↑ Moore AL, Siedow JN (1991). «The regulation and nature of the cyanide-resistant alternative oxidase of plant mitochondria». Biochim. Biophys. Acta 1059 (2): 121–40. DOI:10.1016/S0005-2728(05)80197-5. PMID 1883834.
  8. ↑ Berthold DA, Stenmark P (2003). «Membrane-bound diiron carboxylate proteins». Annual review of plant biology 54: 497–517. DOI:10.1146/annurev.arplant.54.031902.134915. PMID 14503001.
  9. ↑ Berthold DA, Andersson ME, Nordlund P (2000). «New insight into the structure and function of the alternative oxidase». Biochim. Biophys. Acta 1460 (2-3): 241–54. DOI:10.1016/S0005-2728(00)00149-3. PMID 11106766.
  10. ↑ Berthold DA, Voevodskaya N, Stenmark P, Graslund A, Nordlund P (2002). «[www.jbc.org/cgi/content/full/277/46/43608 EPR studies of the mitochondrial alternative oxidase. Evidence for a diiron carboxylate center]». J. Biol. Chem. 277 (46): 43608–14. DOI:10.1074/jbc.M206724200. PMID 12215444.
  11. ↑ Affourtit C, Albury MS, Crichton PG, Moore AL (2002). «Exploring the molecular nature of alternative oxidase regulation and catalysis». FEBS Lett. 510 (3): 121–6. DOI:10.1016/S0014-5793(01)03261-6. PMID 11801238.
  12. ↑ Vanlerberghe GC, McIntosh L (1997). «Alternative oxidase: From Gene to Function». Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology 48: 703–734. DOI:10.1146/annurev.arplant.48.1.703. PMID 15012279.
  13. ↑ Ito Y, Saisho D, Nakazono M, Tsutsumi N, Hirai A (1997). «Transcript levels of tandem-arranged alternative oxidase genes in rice are increased by low temperature». Gene 203 (2): 121–9. DOI:10.1016/S0378-1119(97)00502-7. PMID 9426242.
  14. ↑ Maxwell DP, Wang Y, McIntosh L (1999). «[www.pnas.org/cgi/content/full/96/14/8271 The alternative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cells]». Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (14): 8271–6. DOI:10.1073/pnas.96.14.8271. PMID 10393984.
  15. ↑ Chaudhuri M, Ott RD, Hill GC (2006). «Trypanosome alternative oxidase: from molecule to function». Trends Parasitol. 22 (10): 484–91. DOI:10.1016/j.pt.2006.08.007. PMID 16920028.
  16. ↑ Clarkson AB, Bienen EJ, Pollakis G, Grady RW (1989). «[www.jbc.org/cgi/reprint/264/30/17770.pdf Respiration of bloodstream forms of the parasite Trypanosoma brucei brucei is dependent on a plant-like alternative oxidase]». J. Biol. Chem. 264 (30): 17770–6. PMID 2808350.
  17. ↑ Nihei C, Fukai Y, Kita K (2002). «Trypanosome alternative oxidase as a target of chemotherapy». Biochim. Biophys. Acta 1587 (2-3): 234–9. DOI:10.1016/s0925-4439(02)00086-8. PMID 12084465.
  18. ↑ Grady RW, Bienen EJ, Dieck HA, Saric M, Clarkson AB (1993). «[aac.asm.org/cgi/reprint/37/5/1082.pdf N-n-alkyl-3,4-dihydroxybenzamides as inhibitors of the trypanosome alternative oxidase: activity in vitro and in vivo]». Antimicrob. Agents Chemother. 37 (5): 1082–5. DOI:10.1128/aac.37.5.1082. PMID 8517695.
  19. ↑ Minagawa N, Yabu Y, Kita K, Nagai K, Ohta N, Meguro K, Sakajo S, Yoshimoto A (1997). «An antibiotic, ascofuranone, specifically inhibits respiration and in vitro growth of long slender bloodstream forms of Trypanosoma brucei brucei». Mol. Biochem. Parasitol. 84 (2): 271–80. DOI:10.1016/S0166-6851(96)02797-1. PMID 9084049.
  20. ↑ Yabu Y, Yoshida A, Suzuki T, Nihei C, Kawai K, Minagawa N, Hosokawa T, Nagai K, Kita K, Ohta N (2003). «The efficacy of ascofuranone in a consecutive treatment on Trypanosoma brucei brucei in mice». Parasitol. Int. 52 (2): 155–64. DOI:10.1016/S1383-5769(03)00012-6. PMID 12798927.
  21. ↑ Miguez M, Reeve C, Wood PM, Hollomon DW (2004). «Alternative oxidase reduces the sensitivity of Mycosphaerella graminicola to QOI fungicides». Pest Manag. Sci. 60 (1): 3–7. DOI:10.1002/ps.837. PMID 14727735.
  22. ↑ Avila-Adame C, Koller W (2003). «Impact of alternative respiration and target-site mutations on responses of germinating conidia of Magnaporthe grisea to Qo-inhibiting fungicides». Pest Manag. Sci. 59 (3): 303–9. DOI:10.1002/ps.638. PMID 12639047.
  23. ↑ 1 2 Riyad El-Khoury, Eric Dufour, Malgorzata Rak, Nelina Ramanantsoa, Nicolas Grandchamp, Zsolt Csaba, Bertrand Duvillié, Paule Bénit, Jorge Gallego, Pierre Gressens, Chamsy Sarkis, Howard T. Jacobs, Pierre Rustin (January 2013). «Alternative Oxidase Expression in the Mouse Enables Bypassing Cytochrome c Oxidase Blockade and Limits Mitochondrial ROS Overproduction». Plos One. DOI:10.1371/journal.pgen.1003182.
  24. ↑ Gelhaye E., Rouhier N., Gerard J., Jolivet Y., Gualberto J., Navrot N., Ohlsson P.-I., Wingsle G., Hirasawa M., Knaff D. B., Wang H., Dizengremel P., Meyer Y., Jacquot J.-P. A specific form of thioredoxin h occurs in plant mitochondria and regulates the alternative oxidase // Proceedings of the National Academy of Sciences. — 2004. — Vol. 101. — P. 14545-14550. — ISSN [www.sigla.ru/table.jsp?f=8&t=3&v0=0027-8424&f=1003&t=1&v1=&f=4&t=2&v2=&f=21&t=3&v3=&f=1016&t=3&v4=&f=1016&t=3&v5=&bf=4&b=&d=0&ys=&ye=&lng=&ft=&mt=&dt=&vol=&pt=&iss=&ps=&pe=&tr=&tro=&cc=UNION&i=1&v=tagged&s=0&ss=0&st=0&i18n=ru&rlf=&psz=20&bs=20&ce=hJfuypee8JzzufeGmImYYIpZKRJeeOeeWGJIZRrRRrdmtdeee88NJJJJpeeefTJ3peKJJ3UWWPtzzzzzzzzzzzzzzzzzbzzvzzpy5zzjzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzztzzzzzzzbzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzzvzzzzzzyeyTjkDnyHzTuueKZePz9decyzzLzzzL*.c8.NzrGJJvufeeeeeJheeyzjeeeeJh*peeeeKJJJJJJJJJJmjHvOJJJJJJJJJfeeeieeeeSJJJJJSJJJ3TeIJJJJ3..E.UEAcyhxD.eeeeeuzzzLJJJJ5.e8JJJheeeeeeeeeeeeyeeK3JJJJJJJJ*s7defeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeSJJJJJJJJZIJJzzz1..6LJJJJJJtJJZ4....EK*&debug=false 0027-8424]. — DOI:10.1073/pnas.0405282101. исправить
  25. ↑ Ann L. Umbach, Vicki S. Ng,James Siedow (February 2006). «Regulation of plant alternative oxidase activity: A tale of two cysteines.». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics 106 (2): 135–142. DOI:10.1016/j.bbabio.2005.12.005.
  26. ↑ David A. Day,A. Harvey Millar, Joseph T. Wiskich, and James Whelan (1994). «[www.plantphysiol.org/content/106/4/1421.full.pdf Regulation of Alternative Oxidase Activity by Pyruvate in Soybean Mitochondria]». PlantPhysiol. 106: 1421-1427.

Литература

  • Н. Д. Алехина, Ю. В. Балнокин, В. Ф. Гавриленко и др. Физиология растений / Под ред. И. П. Ермакова. — М.: «Academia», 2005. — С. 252—268. — 640 с. — ISBN 978-5-7695-3688-5.

Ссылки

  • [www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/etp/etp1t3.html Electron transport proteins]
  • [www.ebi.ac.uk/interpro/DisplayIproEntry?ac=IPR002680 InterPro entry on alternative oxidases]
  • MeSH alternative+oxidase
  • [www.tau.ac.il/~ecology/virtau/2-elitsur/ey.htm#AlternativeRespiration Alternative respiration] Root Research Introduction Virtual Course Seminar

Отрывок, характеризующий Альтернативная оксидаза

– Я рад, что мог сделать вам приятное, любезная моя Анна Михайловна, – сказал князь Василий, оправляя жабо и в жесте и голосе проявляя здесь, в Москве, перед покровительствуемою Анною Михайловной еще гораздо большую важность, чем в Петербурге, на вечере у Annette Шерер.
– Старайтесь служить хорошо и быть достойным, – прибавил он, строго обращаясь к Борису. – Я рад… Вы здесь в отпуску? – продиктовал он своим бесстрастным тоном.
– Жду приказа, ваше сиятельство, чтоб отправиться по новому назначению, – отвечал Борис, не выказывая ни досады за резкий тон князя, ни желания вступить в разговор, но так спокойно и почтительно, что князь пристально поглядел на него.
– Вы живете с матушкой?
– Я живу у графини Ростовой, – сказал Борис, опять прибавив: – ваше сиятельство.
– Это тот Илья Ростов, который женился на Nathalie Шиншиной, – сказала Анна Михайловна.
– Знаю, знаю, – сказал князь Василий своим монотонным голосом. – Je n'ai jamais pu concevoir, comment Nathalieie s'est decidee a epouser cet ours mal – leche l Un personnage completement stupide et ridicule.Et joueur a ce qu'on dit. [Я никогда не мог понять, как Натали решилась выйти замуж за этого грязного медведя. Совершенно глупая и смешная особа. К тому же игрок, говорят.]
– Mais tres brave homme, mon prince, [Но добрый человек, князь,] – заметила Анна Михайловна, трогательно улыбаясь, как будто и она знала, что граф Ростов заслуживал такого мнения, но просила пожалеть бедного старика. – Что говорят доктора? – спросила княгиня, помолчав немного и опять выражая большую печаль на своем исплаканном лице.
– Мало надежды, – сказал князь.
– А мне так хотелось еще раз поблагодарить дядю за все его благодеяния и мне и Боре. C'est son filleuil, [Это его крестник,] – прибавила она таким тоном, как будто это известие должно было крайне обрадовать князя Василия.
Князь Василий задумался и поморщился. Анна Михайловна поняла, что он боялся найти в ней соперницу по завещанию графа Безухого. Она поспешила успокоить его.
– Ежели бы не моя истинная любовь и преданность дяде, – сказала она, с особенною уверенностию и небрежностию выговаривая это слово: – я знаю его характер, благородный, прямой, но ведь одни княжны при нем…Они еще молоды… – Она наклонила голову и прибавила шопотом: – исполнил ли он последний долг, князь? Как драгоценны эти последние минуты! Ведь хуже быть не может; его необходимо приготовить ежели он так плох. Мы, женщины, князь, – она нежно улыбнулась, – всегда знаем, как говорить эти вещи. Необходимо видеть его. Как бы тяжело это ни было для меня, но я привыкла уже страдать.
Князь, видимо, понял, и понял, как и на вечере у Annette Шерер, что от Анны Михайловны трудно отделаться.
– Не было бы тяжело ему это свидание, chere Анна Михайловна, – сказал он. – Подождем до вечера, доктора обещали кризис.
– Но нельзя ждать, князь, в эти минуты. Pensez, il у va du salut de son ame… Ah! c'est terrible, les devoirs d'un chretien… [Подумайте, дело идет о спасения его души! Ах! это ужасно, долг христианина…]
Из внутренних комнат отворилась дверь, и вошла одна из княжен племянниц графа, с угрюмым и холодным лицом и поразительно несоразмерною по ногам длинною талией.
Князь Василий обернулся к ней.
– Ну, что он?
– Всё то же. И как вы хотите, этот шум… – сказала княжна, оглядывая Анну Михайловну, как незнакомую.
– Ah, chere, je ne vous reconnaissais pas, [Ах, милая, я не узнала вас,] – с счастливою улыбкой сказала Анна Михайловна, легкою иноходью подходя к племяннице графа. – Je viens d'arriver et je suis a vous pour vous aider a soigner mon oncle . J`imagine, combien vous avez souffert, [Я приехала помогать вам ходить за дядюшкой. Воображаю, как вы настрадались,] – прибавила она, с участием закатывая глаза.
Княжна ничего не ответила, даже не улыбнулась и тотчас же вышла. Анна Михайловна сняла перчатки и в завоеванной позиции расположилась на кресле, пригласив князя Василья сесть подле себя.
– Борис! – сказала она сыну и улыбнулась, – я пройду к графу, к дяде, а ты поди к Пьеру, mon ami, покаместь, да не забудь передать ему приглашение от Ростовых. Они зовут его обедать. Я думаю, он не поедет? – обратилась она к князю.
– Напротив, – сказал князь, видимо сделавшийся не в духе. – Je serais tres content si vous me debarrassez de ce jeune homme… [Я был бы очень рад, если бы вы меня избавили от этого молодого человека…] Сидит тут. Граф ни разу не спросил про него.
Он пожал плечами. Официант повел молодого человека вниз и вверх по другой лестнице к Петру Кирилловичу.


Пьер так и не успел выбрать себе карьеры в Петербурге и, действительно, был выслан в Москву за буйство. История, которую рассказывали у графа Ростова, была справедлива. Пьер участвовал в связываньи квартального с медведем. Он приехал несколько дней тому назад и остановился, как всегда, в доме своего отца. Хотя он и предполагал, что история его уже известна в Москве, и что дамы, окружающие его отца, всегда недоброжелательные к нему, воспользуются этим случаем, чтобы раздражить графа, он всё таки в день приезда пошел на половину отца. Войдя в гостиную, обычное местопребывание княжен, он поздоровался с дамами, сидевшими за пяльцами и за книгой, которую вслух читала одна из них. Их было три. Старшая, чистоплотная, с длинною талией, строгая девица, та самая, которая выходила к Анне Михайловне, читала; младшие, обе румяные и хорошенькие, отличавшиеся друг от друга только тем, что у одной была родинка над губой, очень красившая ее, шили в пяльцах. Пьер был встречен как мертвец или зачумленный. Старшая княжна прервала чтение и молча посмотрела на него испуганными глазами; младшая, без родинки, приняла точно такое же выражение; самая меньшая, с родинкой, веселого и смешливого характера, нагнулась к пяльцам, чтобы скрыть улыбку, вызванную, вероятно, предстоящею сценой, забавность которой она предвидела. Она притянула вниз шерстинку и нагнулась, будто разбирая узоры и едва удерживаясь от смеха.
– Bonjour, ma cousine, – сказал Пьер. – Vous ne me гесоnnaissez pas? [Здравствуйте, кузина. Вы меня не узнаете?]
– Я слишком хорошо вас узнаю, слишком хорошо.
– Как здоровье графа? Могу я видеть его? – спросил Пьер неловко, как всегда, но не смущаясь.
– Граф страдает и физически и нравственно, и, кажется, вы позаботились о том, чтобы причинить ему побольше нравственных страданий.
– Могу я видеть графа? – повторил Пьер.
– Гм!.. Ежели вы хотите убить его, совсем убить, то можете видеть. Ольга, поди посмотри, готов ли бульон для дяденьки, скоро время, – прибавила она, показывая этим Пьеру, что они заняты и заняты успокоиваньем его отца, тогда как он, очевидно, занят только расстроиванием.
Ольга вышла. Пьер постоял, посмотрел на сестер и, поклонившись, сказал:
– Так я пойду к себе. Когда можно будет, вы мне скажите.
Он вышел, и звонкий, но негромкий смех сестры с родинкой послышался за ним.
На другой день приехал князь Василий и поместился в доме графа. Он призвал к себе Пьера и сказал ему:
– Mon cher, si vous vous conduisez ici, comme a Petersbourg, vous finirez tres mal; c'est tout ce que je vous dis. [Мой милый, если вы будете вести себя здесь, как в Петербурге, вы кончите очень дурно; больше мне нечего вам сказать.] Граф очень, очень болен: тебе совсем не надо его видеть.
С тех пор Пьера не тревожили, и он целый день проводил один наверху, в своей комнате.
В то время как Борис вошел к нему, Пьер ходил по своей комнате, изредка останавливаясь в углах, делая угрожающие жесты к стене, как будто пронзая невидимого врага шпагой, и строго взглядывая сверх очков и затем вновь начиная свою прогулку, проговаривая неясные слова, пожимая плечами и разводя руками.
– L'Angleterre a vecu, [Англии конец,] – проговорил он, нахмуриваясь и указывая на кого то пальцем. – M. Pitt comme traitre a la nation et au droit des gens est condamiene a… [Питт, как изменник нации и народному праву, приговаривается к…] – Он не успел договорить приговора Питту, воображая себя в эту минуту самим Наполеоном и вместе с своим героем уже совершив опасный переезд через Па де Кале и завоевав Лондон, – как увидал входившего к нему молодого, стройного и красивого офицера. Он остановился. Пьер оставил Бориса четырнадцатилетним мальчиком и решительно не помнил его; но, несмотря на то, с свойственною ему быстрою и радушною манерой взял его за руку и дружелюбно улыбнулся.
– Вы меня помните? – спокойно, с приятной улыбкой сказал Борис. – Я с матушкой приехал к графу, но он, кажется, не совсем здоров.
– Да, кажется, нездоров. Его всё тревожат, – отвечал Пьер, стараясь вспомнить, кто этот молодой человек.
Борис чувствовал, что Пьер не узнает его, но не считал нужным называть себя и, не испытывая ни малейшего смущения, смотрел ему прямо в глаза.
– Граф Ростов просил вас нынче приехать к нему обедать, – сказал он после довольно долгого и неловкого для Пьера молчания.
– А! Граф Ростов! – радостно заговорил Пьер. – Так вы его сын, Илья. Я, можете себе представить, в первую минуту не узнал вас. Помните, как мы на Воробьевы горы ездили c m me Jacquot… [мадам Жако…] давно.
– Вы ошибаетесь, – неторопливо, с смелою и несколько насмешливою улыбкой проговорил Борис. – Я Борис, сын княгини Анны Михайловны Друбецкой. Ростова отца зовут Ильей, а сына – Николаем. И я m me Jacquot никакой не знал.
Пьер замахал руками и головой, как будто комары или пчелы напали на него.
– Ах, ну что это! я всё спутал. В Москве столько родных! Вы Борис…да. Ну вот мы с вами и договорились. Ну, что вы думаете о булонской экспедиции? Ведь англичанам плохо придется, ежели только Наполеон переправится через канал? Я думаю, что экспедиция очень возможна. Вилльнев бы не оплошал!
Борис ничего не знал о булонской экспедиции, он не читал газет и о Вилльневе в первый раз слышал.
– Мы здесь в Москве больше заняты обедами и сплетнями, чем политикой, – сказал он своим спокойным, насмешливым тоном. – Я ничего про это не знаю и не думаю. Москва занята сплетнями больше всего, – продолжал он. – Теперь говорят про вас и про графа.
Пьер улыбнулся своей доброю улыбкой, как будто боясь за своего собеседника, как бы он не сказал чего нибудь такого, в чем стал бы раскаиваться. Но Борис говорил отчетливо, ясно и сухо, прямо глядя в глаза Пьеру.
– Москве больше делать нечего, как сплетничать, – продолжал он. – Все заняты тем, кому оставит граф свое состояние, хотя, может быть, он переживет всех нас, чего я от души желаю…
– Да, это всё очень тяжело, – подхватил Пьер, – очень тяжело. – Пьер всё боялся, что этот офицер нечаянно вдастся в неловкий для самого себя разговор.
– А вам должно казаться, – говорил Борис, слегка краснея, но не изменяя голоса и позы, – вам должно казаться, что все заняты только тем, чтобы получить что нибудь от богача.
«Так и есть», подумал Пьер.
– А я именно хочу сказать вам, чтоб избежать недоразумений, что вы очень ошибетесь, ежели причтете меня и мою мать к числу этих людей. Мы очень бедны, но я, по крайней мере, за себя говорю: именно потому, что отец ваш богат, я не считаю себя его родственником, и ни я, ни мать никогда ничего не будем просить и не примем от него.
Пьер долго не мог понять, но когда понял, вскочил с дивана, ухватил Бориса за руку снизу с свойственною ему быстротой и неловкостью и, раскрасневшись гораздо более, чем Борис, начал говорить с смешанным чувством стыда и досады.
– Вот это странно! Я разве… да и кто ж мог думать… Я очень знаю…
Но Борис опять перебил его:
– Я рад, что высказал всё. Может быть, вам неприятно, вы меня извините, – сказал он, успокоивая Пьера, вместо того чтоб быть успокоиваемым им, – но я надеюсь, что не оскорбил вас. Я имею правило говорить всё прямо… Как же мне передать? Вы приедете обедать к Ростовым?
И Борис, видимо свалив с себя тяжелую обязанность, сам выйдя из неловкого положения и поставив в него другого, сделался опять совершенно приятен.
– Нет, послушайте, – сказал Пьер, успокоиваясь. – Вы удивительный человек. То, что вы сейчас сказали, очень хорошо, очень хорошо. Разумеется, вы меня не знаете. Мы так давно не видались…детьми еще… Вы можете предполагать во мне… Я вас понимаю, очень понимаю. Я бы этого не сделал, у меня недостало бы духу, но это прекрасно. Я очень рад, что познакомился с вами. Странно, – прибавил он, помолчав и улыбаясь, – что вы во мне предполагали! – Он засмеялся. – Ну, да что ж? Мы познакомимся с вами лучше. Пожалуйста. – Он пожал руку Борису. – Вы знаете ли, я ни разу не был у графа. Он меня не звал… Мне его жалко, как человека… Но что же делать?
– И вы думаете, что Наполеон успеет переправить армию? – спросил Борис, улыбаясь.
Пьер понял, что Борис хотел переменить разговор, и, соглашаясь с ним, начал излагать выгоды и невыгоды булонского предприятия.
Лакей пришел вызвать Бориса к княгине. Княгиня уезжала. Пьер обещался приехать обедать затем, чтобы ближе сойтись с Борисом, крепко жал его руку, ласково глядя ему в глаза через очки… По уходе его Пьер долго еще ходил по комнате, уже не пронзая невидимого врага шпагой, а улыбаясь при воспоминании об этом милом, умном и твердом молодом человеке.
Как это бывает в первой молодости и особенно в одиноком положении, он почувствовал беспричинную нежность к этому молодому человеку и обещал себе непременно подружиться с ним.
Князь Василий провожал княгиню. Княгиня держала платок у глаз, и лицо ее было в слезах.
– Это ужасно! ужасно! – говорила она, – но чего бы мне ни стоило, я исполню свой долг. Я приеду ночевать. Его нельзя так оставить. Каждая минута дорога. Я не понимаю, чего мешкают княжны. Может, Бог поможет мне найти средство его приготовить!… Adieu, mon prince, que le bon Dieu vous soutienne… [Прощайте, князь, да поддержит вас Бог.]
– Adieu, ma bonne, [Прощайте, моя милая,] – отвечал князь Василий, повертываясь от нее.
– Ах, он в ужасном положении, – сказала мать сыну, когда они опять садились в карету. – Он почти никого не узнает.
– Я не понимаю, маменька, какие его отношения к Пьеру? – спросил сын.
– Всё скажет завещание, мой друг; от него и наша судьба зависит…
– Но почему вы думаете, что он оставит что нибудь нам?
– Ах, мой друг! Он так богат, а мы так бедны!
– Ну, это еще недостаточная причина, маменька.
– Ах, Боже мой! Боже мой! Как он плох! – восклицала мать.


Когда Анна Михайловна уехала с сыном к графу Кириллу Владимировичу Безухому, графиня Ростова долго сидела одна, прикладывая платок к глазам. Наконец, она позвонила.
– Что вы, милая, – сказала она сердито девушке, которая заставила себя ждать несколько минут. – Не хотите служить, что ли? Так я вам найду место.
Графиня была расстроена горем и унизительною бедностью своей подруги и поэтому была не в духе, что выражалось у нее всегда наименованием горничной «милая» и «вы».
– Виновата с, – сказала горничная.
– Попросите ко мне графа.
Граф, переваливаясь, подошел к жене с несколько виноватым видом, как и всегда.
– Ну, графинюшка! Какое saute au madere [сотэ на мадере] из рябчиков будет, ma chere! Я попробовал; не даром я за Тараску тысячу рублей дал. Стоит!
Он сел подле жены, облокотив молодецки руки на колена и взъерошивая седые волосы.
– Что прикажете, графинюшка?
– Вот что, мой друг, – что это у тебя запачкано здесь? – сказала она, указывая на жилет. – Это сотэ, верно, – прибавила она улыбаясь. – Вот что, граф: мне денег нужно.
Лицо ее стало печально.
– Ах, графинюшка!…
И граф засуетился, доставая бумажник.
– Мне много надо, граф, мне пятьсот рублей надо.
И она, достав батистовый платок, терла им жилет мужа.


Источник — «http://wiki-org.ru/wiki/index.php?title=Альтернативная_оксидаза&oldid=80571758»