Натрий-фосфатный буфер
Натрий-фосфатный буфер (англ. Phosphate buffered saline, PBS) — буферный раствор, используемый в биологических исследованиях. Представляет собой водный раствор солей, содержащий хлорид натрия, гидрофосфат натрия, хлорид калия и дигидрофосфат калия. Осмолярность и концентрации ионов в растворе обычно соответствуют концентрациям в теле человека (то есть данный буферный раствор является изотоническим).
Содержание
Применение
Натрий-фосфатный буфер находит широкое применение, так как является изотоническим и нетоксичен для клеток. PBS используют для растворения веществ, для ополаскивания контейнеров, содержащих клетки.
Приготовление
Существует много способов приготовления натрий-фосфатного буфера. Некоторые формулы не содержат калия, другие содержат кальций или магний.[1]
| Соль | Концентрация mM |
Концентрация г/л |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8,00 |
| KCl | 2,7 | 0,20 |
| Na2HPO4 | 10 | 1,44 |
| KH2PO4 | 1,76 | 0,24 |
| pH | 7,4 | 7,4 |
Для приготовления 1 литра однократного натрий-фосфатного буфера используют:[2]
- 8,00 г NaCl
- 0,20 г KCl
- 1,44 г Na2HPO4
- 0,24 г KH2PO4
- растворяют в 800 мл дистиллированной воды
- доводят рН до 7,4 соляной кислотой или гидроксидом натрия
- добавляют дистиллированной воды до 1 литра.
Десять литров стокового раствора десятикратного PBS можно приготовить растворив 800 г NaCl, 20 г KCl, 144 г Na2HPO4 и 24 г KH2PO4 в восьми литрах дистиллированной воды, доведя далее объём до десяти литров. рН получившегося раствора будет примерно 6,8, но после разведения до однократного PBS станет равным 7,4. После приготовления раствора следует проверить значение рН при помощи рН-метра. При необходимости, можно скорректировать рН при помощи соляной кислоты или гидроксида натрия.
Наиболее простым способом приготовления натрий-фосфатного буфера является использование коммерчески доступных таблетированных препаратов. Такие таблетки разводят дистиллированной водой до заданного объема и получают раствор заданной концентрации.
Для клеточных культур раствор должен быть разлит на аликвоты и стерилизован автоклавированием (20 минут при 121 °C, в режиме жидкость). Стерилизация не является необходимой, в зависимости от особенностей использования. Возможно хранение натрий-фосфатного буфера при комнатной температуре, однако для предотвращения размножения бактерий длительное хранение нестерильного буфера рекомендуют осуществлять в холодильнике. Соли в концентрированных стоковых растворах при охлаждении могут выпадать в осадок, поэтому перед применением рекомендуют нагреть концентрированный раствор до комнатной температуры и дождаться полного растворения осадка.
Напишите отзыв о статье "Натрий-фосфатный буфер"
Примечания
- ↑ Dulbecco, R. et al. (1954): Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167—182. PMID 13130792
- ↑ Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, appendix B.12
См. также
|
Это заготовка статьи по биохимии. Вы можете помочь проекту, дополнив её. |
Отрывок, характеризующий Натрий-фосфатный буфер
Ростов с фельдшером вошли в коридор. Больничный запах был так силен в этом темном коридоре, что Ростов схватился зa нос и должен был остановиться, чтобы собраться с силами и итти дальше. Направо отворилась дверь, и оттуда высунулся на костылях худой, желтый человек, босой и в одном белье.Он, опершись о притолку, блестящими, завистливыми глазами поглядел на проходящих. Заглянув в дверь, Ростов увидал, что больные и раненые лежали там на полу, на соломе и шинелях.
– А можно войти посмотреть? – спросил Ростов.
– Что же смотреть? – сказал фельдшер. Но именно потому что фельдшер очевидно не желал впустить туда, Ростов вошел в солдатские палаты. Запах, к которому он уже успел придышаться в коридоре, здесь был еще сильнее. Запах этот здесь несколько изменился; он был резче, и чувствительно было, что отсюда то именно он и происходил.
В длинной комнате, ярко освещенной солнцем в большие окна, в два ряда, головами к стенам и оставляя проход по середине, лежали больные и раненые. Большая часть из них были в забытьи и не обратили вниманья на вошедших. Те, которые были в памяти, все приподнялись или подняли свои худые, желтые лица, и все с одним и тем же выражением надежды на помощь, упрека и зависти к чужому здоровью, не спуская глаз, смотрели на Ростова. Ростов вышел на середину комнаты, заглянул в соседние двери комнат с растворенными дверями, и с обеих сторон увидал то же самое. Он остановился, молча оглядываясь вокруг себя. Он никак не ожидал видеть это. Перед самым им лежал почти поперек середняго прохода, на голом полу, больной, вероятно казак, потому что волосы его были обстрижены в скобку. Казак этот лежал навзничь, раскинув огромные руки и ноги. Лицо его было багрово красно, глаза совершенно закачены, так что видны были одни белки, и на босых ногах его и на руках, еще красных, жилы напружились как веревки. Он стукнулся затылком о пол и что то хрипло проговорил и стал повторять это слово. Ростов прислушался к тому, что он говорил, и разобрал повторяемое им слово. Слово это было: испить – пить – испить! Ростов оглянулся, отыскивая того, кто бы мог уложить на место этого больного и дать ему воды.
– Кто тут ходит за больными? – спросил он фельдшера. В это время из соседней комнаты вышел фурштадский солдат, больничный служитель, и отбивая шаг вытянулся перед Ростовым.
– Здравия желаю, ваше высокоблагородие! – прокричал этот солдат, выкатывая глаза на Ростова и, очевидно, принимая его за больничное начальство.
– Убери же его, дай ему воды, – сказал Ростов, указывая на казака.
– Слушаю, ваше высокоблагородие, – с удовольствием проговорил солдат, еще старательнее выкатывая глаза и вытягиваясь, но не трогаясь с места.
– Нет, тут ничего не сделаешь, – подумал Ростов, опустив глаза, и хотел уже выходить, но с правой стороны он чувствовал устремленный на себя значительный взгляд и оглянулся на него. Почти в самом углу на шинели сидел с желтым, как скелет, худым, строгим лицом и небритой седой бородой, старый солдат и упорно смотрел на Ростова. С одной стороны, сосед старого солдата что то шептал ему, указывая на Ростова. Ростов понял, что старик намерен о чем то просить его. Он подошел ближе и увидал, что у старика была согнута только одна нога, а другой совсем не было выше колена. Другой сосед старика, неподвижно лежавший с закинутой головой, довольно далеко от него, был молодой солдат с восковой бледностью на курносом, покрытом еще веснушками, лице и с закаченными под веки глазами. Ростов поглядел на курносого солдата, и мороз пробежал по его спине.
