Флуоресценция хлорофилла

Поделись знанием:
Перейти к: навигация, поиск

Флуоресценция хлорофилла — явление свечения хлорофилла при поглощении им света, происходит в результате возвращении молекулы из возбужденного в основное состояние. Широко используется как показатель фотосинтетического преобразования энергии у высших растений, водорослей и бактерий. Возбужденный хлорофилл теряет поглощенную световую энергию, растрачивая её на фотосинтез (фотохимические преобразования энергии или фотохимическое тушение), переводя её в тепло в результате нефотохимического тушения или излучая в виде флуоресценции. Поскольку все эти процессы конкурируют друг с другом, анализируя флуоресценцию хлорофилла можно получить представления об интенсивности фотосинтеза и здоровьи растения[1].





Эффект Каутского

Основная статья: Эффект Каутского

После освещения адаптированных к темноте листьев, можно наблюдать быстрый рост флуоресценции Фотосистемы II (ФС II) за которым следует медленный спад. Впервые этот феномен описали Х. Каутский и А. Хирш в 1931 году. По имени своего первооткрывателя эффект был назван эффектом Каутского.

Увеличение флуоресценции происходит из-за того, что реакционный центр фотосистемы II (ФСII) находясь в «закрытом» состоянии. Реакционный центр называется «закрытым», когда он больше не в состоянии передавать электроны. Это происходит, когда нижележащий акцепторов электронов перевосстановлен и ещё не передал свои электроны следующему переносчику электронов. Закрытие реакционных центров снижает общую эффективность фотохимических реакций, а потому повышает уровень флуоресценции. Резкий перенос листа из тьмы на свет увеличивается долю закрытых реакционных центров ФСII и приводит к усилению флуоресценции в течение первых 1-2 секунд. Позже флуоресценции медленно ослабевает, этот процесс может идти в течение нескольких минут. Падение обусловлено активацией «фотохимическо тушения» и переноса электронов от ФСII по ЭТЦ хлоропластов к НАДФ и циклу фиксации углерода, а также включением нефотохимического тушения, которое преобразует энергию возбуждения в тепло.

Измерения флуоресценции

Измерения начинают с определения фонового уровеня флуоресценции <math>F_0</math>, который измеряют, воздействуя на лист короткой вспышкой света низкой интенсивности, недостаточной что бы вызвать фотохимическую реакцию (все реакционные центры открыты), и потому полностью идущей на флуоресценцию[2].

Что бы использовать измерение флуоресценции хлорофилла для анализа фотосинтеза, исследователи должны различать фотохимическое тушения и нефотохимическое тушение (тепловыделение). Это достигается путём остановки фотохимических реакций, что позволяет исследователям измерить флуоресценцию в присутствии только нефотохимического тушения. Для этого растение резко освещают сильной вспышкой света или выносят на свет после темновой адаптации. Происходит временное закрытие всех реакционных центров ФСII, и энергия не передается по цепи переносчиков электронов. Нефотохимическое тушение не оказывает влияния, если вспышка достаточно короткая. Во время вспышки (или после резкого выноса растения на свет из темноты) происходит насыщение реакционных центров светом с переходом в закрытое состояние. В таких условиях, когда отсутствует какое-либо фотохимическое тушение, а не фотохимическое тушение пренебрежительно мало, флуоресценции достигает своего максимального уровня, обозначаемого как максимум флуоресценции <math>F_m</math>[2].

Эффективность фотохимического тушения, по которому определяют эффективность работы ФСII, можно оценить сравнивая <math>F_m</math> со стационарным уровнем флуоресценции на свету <math>F_t</math> и фоновый уровень флуоресценции <math>F_0</math> в отсутствие света пригодного для фотосинтеза. Эффективность нефотохимического тушения изменяется в зависимости от различных внутренних и внешних факторов. Его усиление ведёт к повышению тепловыделения и снижению <math>F_m</math>. Поскольку невозможно полностью остановит тепловую диссипацию энергии, то невозможно измерить флуоресценцию хлорофилла при полном отсутствии нефотохимического тушения. Поэтому исследователи используют точку темновой адаптации (<math>F_m^0</math>) с которой сравнивают рассчитанное значение нефотохимическое тушения[2].

Общие параметры флуоресценции

<math>F_0</math>: Минимальная флуоресценция (в относительных единицах). Уровень флуоресценции в условиях, когда предполагается, что все реакционные центры открытые (темновая адаптация).

<math>F_m</math>: Максимальная флуоресценция (в относительных единицах). Уровень флуоресценции при вспышках высокой интенсивности. Все реакционные центры считаются закрытыми.

<math>{F_0}'</math>: Минимальная флуоресценция (в относительных единицах) в условиях адаптации к свету. Уровень флуоресценции облучаемого образца, который снижен по сравнению с <math>F_0</math> из-за наличия нефотохимическое тушение.

<math>{F_m}'</math>: Максимальная флуоресценция (в относительных единицах) в условиях адаптации к свету. Уровень флуоресценции образца, облучаемого насыщающими импульсами света, которые временно закрывают все реакционные центры ФСII.

<math>F_{tr}</math>: Терминальная флуоресценция (в относительных единицах). Тушение флуоресценции по состоянию на конец теста.

<math>T_{1/2}</math>: Половина времени нарастания от <math>F_0</math> до <math>F_m</math>.

Расчётные параметры

<math>F_v</math>: Вариабельная флуоресценция. Рассчитывается как <math>F_v</math> = <math>F_m</math> — <math>F_0</math>[3].

<math>\tfrac{F_v}{F_m}</math>: Отношение переменной флуоресценции и максимальной флуоресценции. Рассчитывается как <math>\frac{F_m-F_0}{F_m}</math>.[4]. Является мерой максимальной эффективности ФСII (если все центры были открыты). <math>\tfrac{F_v}{F_m}</math> можно использовать для оценки потенциальной эффективности ФСII, если измерять образцы в условиях темновой адаптации.

<math>qP</math>: Фотохимическое тушение. этот параметр даёт приблизительную оценку доли открытых реакционных центров ФСII. Рассчитывается как <math>\frac{{F_m}'-F}{{F_m}'-{F_0}'}</math>[5].

<math>\Phi_{PSII}</math>: Эффективность фотохимических реакций фотосистемы II. Рассчитывается как <math>Y_{(II)}</math> = <math>\tfrac{{F_m}'-F}{{F_m}'}</math>[6]. Этот параметр показывает долю света, поглощённого ФСII, который использовался в фотохимических реакциях. Как таковой, он может дать измерение скорости линейного транспорта электронов и поэтому характеризует весь фотосинтез в целом.

<math>\Phi_{PSII}</math> даёт оценку эффективности фотосинтеза, а <math>qP</math> и <math>\tfrac{F_v}{F_m}</math> говорят нам какие процессы влияют на эффективность. Закрытие реакционных центров в результате высокой интенсивности света изменит значение <math>qP</math>. Изменения в эффективности нефотохимического тушения изменит соотношение <math>\tfrac{F_v}{F_m}</math>.

Практическое использование

Эффективность фотосистемы II как мера фотосинтеза

Флуоресценция хлорофилла используется для измерения уровня фотосинтеза, но по сути своей это чрезмерное упрощение. По флуоресценции можно измерить эффективность фотохимии ФСII, которую можно использовать для оценки скорости линейного транспорта электронов путём умножения на интенсивность света. Однако, когда исследователи говорят «фотосинтез», они обычно подразумевают фиксацию углерода. Транспорт электронов и фиксация CО2 имею довольно хорошую корреляцию, но её может не наблюдаться в полевых условиях из-за таких процессов как фотодыхание, азотистый обмен и реакция Мелера.

Связь транспорта электронов с фиксаций углекислого газа

Для одновременного измерения флуоресценции хлорофилла и газообмена, чтобы получить полную картину реакции растений на их окружение необходима серьёзная и сложная исследовательская техника. Один из методов заключается в одновременном измерении фиксации СО2 и фотохимических реакций ФСII при различной интенсивности света, в условиях подавляющих фотодыхание. Графики фиксации СО2 и фотохимических реакций ФСII позволяют вычислить количество электронов, необходимых для ассимиляции одной молекулы СО2. Исходя их этой оценки можно оценить уровень фотодыхания. Этот метод используется для исследования значимости фотодыхания в качестве фотозащитного механизма во время засухи.

  • Собраду (2008)[7] исследовал газообмен и флуоресценцию хлорофилла в ответ на высокую интенсивность света у пионерных и лесных видов. В полдень производился замер газообмена листьев с измерением общего уровня фотосинтеза и межклеточной концентрации СО2 (<math>C_i</math>). В тех же листьях измерялись параметры флуоресценция хлорофилла (фоновая <math>F_0</math>; максимум <math>F_m</math>; и переменная, <math>F_v</math>). Результаты показали, что, несмотря на то, что пионерные и лесные виды происходят из разных местообитаний, и те и другие показали схожую уязвимость к полуденному фотоингибированию.

Измерение уровня стресса и стрессоустойчивости

Флуоресценция хлорофилла позволяет измерить уровень стресса растений. По её уровню можно судить об уровне воздействия абиотических стрессов, поскольку экстремальные температуры, избыточное освещение и засуха негативно влияют на метаболизм растений. Это в свою очередь приводит к дисбалансу между поглощением световой энергии хлорофиллом и использованием этой энергии в процессе фотосинтеза[8].

  • Фаваретто и соавт. (2010)[9] исследовали адаптацию к сильному свету у пионерных и поздних сукцессионных видов, выращенных в условиях 100 % (на солнце) и 10 % (в тени) от нормального освещения. Снижение <math>\tfrac{F_v}{F_m}</math> при полном освещении оказалось больше у поздних сукцессионных видов, чем у пионерных видов. В целом эти результаты показывают, что пионерные виды лучше растут при полном освещении, чем позднесукцессионные виды, что предполагает наличие у них высокой толерантности к фотоокислительным повреждениям.
  • Неоклеус и Vasilakakis (2009)[3] исследовали реакциюмалины на бор и солевой стресс. При помощи флуориметра они замерили <math>F_0</math>, <math>F_m</math> и <math>F_v</math>. Флуоресценция хлорофилла листа незначительно зависила от концентрации NaCl, когда концентрация бора была низкой. Когда концентрацию бора увеличивали, флуоресценция хлорофилла листьев снижалась тех же условиях засоления. Можно сделать вывод, что комбинированное воздействие бора и NaCl на малину вызывает токсический эффект, влияя на фотохимические параметры.

Индекс азотистого баланса

Учитывая связь между содержанием хлорофилла и азота в листьях, содержание хлорофилла можно использовать для обнаружения дефицит азота у растений. Для этого существует несколько разных методов.

Оказалось, что можно судить об азотистом метаболизме растений по уровню полифенолов. Когда растение находится в оптимальных условиях, это способствует нормальному обмену веществ и синтезу белков (основная форма биологического азота), хлорофиллов, и небольшого количества флавоноидов (вторичные метаболиты). С другой стороны, в случае нехватки азота, наблюдается повышенная выработка флавоноидов[10].

Индекс азотистого баланса позволяет оценить содержание азота в естественных условиях путём расчета соотношения между хлорофиллом и флавоноидами.

Измерение содержания хлорофилла

Гительзон (1999) постулировал: «Соотношение между флуоресценцией хлорофилла при 735 нм и в диапазоне длин волн от 700 нм до 710 нм, линейно связано с содержанием хлорофилла (с коэффициентом детерминации r2 более чем 0,95) и таким образом может быть использовано как точный показатель содержания хлорофилла в листьях растений.»[11]

Флуориметры

Развитие флуориметров сделало измерение флуоресценции хлорофилла обычным методом в физиологии растений. Революцию в анализе флуоресценции хлорофилла произвело изобретение методики пульс-амплитудной модуляции (англ. Pulse-Amplitude-Modulation (PAM))[12][13] и появление первого коммерческого импульсного флуориметра или ПАМ-флуориметра PAM-101 (компания Walz, Германия). Путём модуляции амплитуды измеряющего светового пучка (микросекундный диапазон импульсов) и параллельного обнаружения возбуждаемой флуоресценции, можно определить относительный выход флуоресценции (Ft) в присутствии рассеянного света. Принципиально, это означает, что флуоресценция хлорофилла можно измерять в полевых условиях даже под прямыми лучами солнца[2].

Некоторые импульсные флуориметры могут определить как световые параметры, так и параметры темновая адаптация параметров (Fo, Fm, Fo', Fm', Fv/Fm, Y, Ft, Foq) и могут рассчитать коэффициенты тушения фотохимического и нефотохимического тушение (qP, qL, qN, Y(NO), Y(NPQ) и NPQ). Некоторые флуориметры полностью портативны и управляется одной рукой.

Развитие системы визуализации облегчило определение пространственных неоднородностей у фотосинтетически активных образцов. Эти неоднородности возникают в листья растений, например из-за наростов, различных экологических стрессов или возбудителя инфекции. Знания о неоднородностях образца имеет важное значение для правильной интерпретации результатов измерения фотосинтетической продуктивности образца. Высокие показатели качества изображения обеспечивают возможность анализа одной клетки или даже одного хлоропласта, а также площадей, охватывающих целые листья или растения.

Альтернативные подходы

LIF-сенсоры

Методы, основанные на эффекте Каутского, не исчерпывают всего многообразия методов измерения флуоресценции хлорофилла. В частности, последние достижения в области лазер-индуцированной флуоресценции (LIF) предоставляют возможность для разработки достаточно компактных и эффективных сенсоров для определения фотофизиологического статуса и оценки биомассы. Вместо измерения общего потока флуоресценции такие датчики регистрируют оптическую плотность этого потока, возбуждённого сильным лазерными импульсами наносекундной длительности. Такой метод не требует 15 — 20 мин темновой адаптации (как в случае с методами, основанными на эффекте Каутского[14]) и даёт возможность возбуждать образец со значительного расстояния. LIF-сенсоры могут обеспечить быструю и оценку с довольно большого расстояния.

См. также

Напишите отзыв о статье "Флуоресценция хлорофилла"

Примечания

  1. ↑ Lu Congming, Zhang Jianhua (July 1999). «[jxb.oxfordjournals.org/content/50/336/1199.full.pdf Effects of Water Stress on Photosystem II Photochemistry and Its Thermostability in Wheat Plants]». Oxford Journals.
  2. ↑ 1 2 3 4 [jxb.oxfordjournals.org/content/51/345/659.full.pdf+html Chlorophyll fluorescence—a practical guide]. Jxb.oxfordjournals.org (1 апреля 2000). Проверено 28 марта 2011.
  3. ↑ 1 2 [www.informaworld.com/smpp/content~db=all~content=a906673051~frm=abslink Effects of Boron and Salinity on Red Raspberry in Vitro - International Journal of Fruit Science]. Informaworld.com (3 декабря 2008). Проверено 28 марта 2011.
  4. ↑ Kitajima M, Butler WL (1975). «Quenching of chlorophyll fluorescence and primary photochemistry in chloroplasts by dibromothymoquinone.». Biochim Biophys Acta 376: 105–115. DOI:10.1016/0005-2728(75)90209-1.
  5. ↑ «Continuous recording of photochemical and non-photochemical chlorophyll fluorescence quenching with a new type of modulation fluorometer.». Photosynth Res 10: 51–62. DOI:10.1007/bf00024185.
  6. ↑ Genty B, Briantais J-M, Baker NR (1989). «The relationship betwwen the quantum yield of photosynthetic electron transport and quenching of chlorophyll fluorescence.». Biochem Biophys Acta 990: 87–92. DOI:10.1016/s0304-4165(89)80016-9.
  7. ↑ Sobrado. [www.springerlink.com/content/d14258646q4pq146/fulltext.pdf Leaf characteristics and diurnal variation of chlorophyll fluorescence in leaves of the ‘bana’ vegetation of the amazon region] (PDF) (2008).
  8. ↑ [personalpages.manchester.ac.uk/staff/giles.johnson/default.php?page=research Plant Stress Biology]. Personalpages.manchester.ac.uk. Проверено 28 марта 2011.
  9. ↑ Favaretto (2011). «[www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6T66-50CV80C-2&_user=10&_coverDate=01%2F31%2F2011&_rdoc=1&_fmt=high&_orig=search&_origin=search&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1586619461&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=0fa9176d9f11b6ab2b20cdfefcc5697a&searchtype=a Differential responses of antioxidant enzymes in pioneer and late-successional tropical tree species grown under sun and shade conditions]».
  10. ↑ A. Cartelat, Z.G. Cerovic, Y. Goulas, S. Meyer, C. Lelarge, J.-L. Prioul, A. Barbottin, M.-H. Jeuffroy, P. Gate, G. Agati, I. Moya (2005). «[www.sciencedirect.com/science/article/pii/S037842900400139X Optically assessed contents of leaf polyphenolics and chlorophyll as indicators of nitrogen deficiency in wheat (Triticum aestivum L.)]» (Field Crops Research Volume 91, Issue 1, pages 35-49).
  11. ↑ Gitelson Anatoly A;Buschmann Claus; Lichtenthaler Hartmut K. (1999). «The Chlorophyll Fluorescence Ratio F735/F700 as an Accurate Measure of the Chlorophyll Content in Plants». Remote Sensing of Environment 69 (3): 296–302. DOI:10.1016/S0034-4257(99)00023-1.
  12. ↑ Schreiber U, Bilger W,and Schliwa U (1986). «[link.springer.com/article/10.1007/BF00024185 Continuous recording of photochemical and non-photochemical chloropyhll fluorescence quenching with a new type of modulation fluorometer]». Photosynth. Res 10: 51–62. DOI:10.1007/bf00024185.
  13. ↑ Schreiber Ulrich (1986). «[link.springer.com/chapter/10.1007/978-94-009-4412-1_24 Detection of rapid induction kinetics with a new type of high-frequency modulated chloropyhll fluorometer]». Photosynth. Res. 9: 261–272. DOI:10.1007/bf00029749.
  14. ↑ [www.hansatech-instruments.com/wp-content/uploads/2012/12/Handy-PEA.pdf Handy PEA: Continuous Excitation Plant Efficiency Analyser]. — Norfolk: Hansatech Instruments. — P. 2.

Литература

  • Lazár (1999). «[www.researchgate.net/publication/247773250_Chlorophyll_a_fluorescence_induction Chlorophyll a fluorescence induction]». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics 1412: 1–28. DOI:10.1016/s0005-2728(99)00047-x.
  • Lazár (2006). «[www.researchgate.net/publication/247772997_The_polyphasic_chlorophyll_a_fluorescence_rise_measured_under_high_intensity_of_exciting_light The polyphasic chlorophyll a fluorescence rise measured under high intensity of exciting light]». Functional Plant Biology 33: 9–30. DOI:10.1071/fp05095.
  • Lazár (2015). «[www.researchgate.net/publication/270646200_Parameters_of_photosynthetic_energy_partitioning Parameters of photosynthetic energy partitioning]». Journal of Plant Physiology 175: 131–147. DOI:10.1016/j.jplph.2014.10.021.
  • Kalaji (2012). «[link.springer.com/article/10.1007%2Fs11120-012-9780-3 Experimental in vivo measurements of light emission in plants: a perspective dedicated to David Walker]». Photosynthesis Research 114: 69–96. DOI:10.1007/s11120-012-9780-3.
  • (2000) «Chlorophyll fluorescence--a practical guide». Journal of Experimental Botany 51 (345): 659–68. DOI:10.1093/jexbot/51.345.659. PMID 10938857.
  • Murchie and Lawson (2013). «Chlorophyll fluorescence analysis: a guide to good practice and understanding some new applications.». Journal of Experimental Botany 64 (13): 3983–3998. DOI:10.1093/jxb/ert208.
  • Heinz Walz GmbH. [www.walz.com/products/categories.html Chloropyhll fluorometer].

Отрывок, характеризующий Флуоресценция хлорофилла

Как бы примериваясь и приготовляясь к предстоящему движению, силы запада несколько раз в 1805 м, 6 м, 7 м, 9 м году стремятся на восток, крепчая и нарастая. В 1811 м году группа людей, сложившаяся во Франции, сливается в одну огромную группу с серединными народами. Вместе с увеличивающейся группой людей дальше развивается сила оправдания человека, стоящего во главе движения. В десятилетний приготовительный период времени, предшествующий большому движению, человек этот сводится со всеми коронованными лицами Европы. Разоблаченные владыки мира не могут противопоставить наполеоновскому идеалу славы и величия, не имеющего смысла, никакого разумного идеала. Один перед другим, они стремятся показать ему свое ничтожество. Король прусский посылает свою жену заискивать милости великого человека; император Австрии считает за милость то, что человек этот принимает в свое ложе дочь кесарей; папа, блюститель святыни народов, служит своей религией возвышению великого человека. Не столько сам Наполеон приготовляет себя для исполнения своей роли, сколько все окружающее готовит его к принятию на себя всей ответственности того, что совершается и имеет совершиться. Нет поступка, нет злодеяния или мелочного обмана, который бы он совершил и который тотчас же в устах его окружающих не отразился бы в форме великого деяния. Лучший праздник, который могут придумать для него германцы, – это празднование Иены и Ауерштета. Не только он велик, но велики его предки, его братья, его пасынки, зятья. Все совершается для того, чтобы лишить его последней силы разума и приготовить к его страшной роли. И когда он готов, готовы и силы.
Нашествие стремится на восток, достигает конечной цели – Москвы. Столица взята; русское войско более уничтожено, чем когда нибудь были уничтожены неприятельские войска в прежних войнах от Аустерлица до Ваграма. Но вдруг вместо тех случайностей и гениальности, которые так последовательно вели его до сих пор непрерывным рядом успехов к предназначенной цели, является бесчисленное количество обратных случайностей, от насморка в Бородине до морозов и искры, зажегшей Москву; и вместо гениальности являются глупость и подлость, не имеющие примеров.
Нашествие бежит, возвращается назад, опять бежит, и все случайности постоянно теперь уже не за, а против него.
Совершается противодвижение с востока на запад с замечательным сходством с предшествовавшим движением с запада на восток. Те же попытки движения с востока на запад в 1805 – 1807 – 1809 годах предшествуют большому движению; то же сцепление и группу огромных размеров; то же приставание серединных народов к движению; то же колебание в середине пути и та же быстрота по мере приближения к цели.
Париж – крайняя цель достигнута. Наполеоновское правительство и войска разрушены. Сам Наполеон не имеет больше смысла; все действия его очевидно жалки и гадки; но опять совершается необъяснимая случайность: союзники ненавидят Наполеона, в котором они видят причину своих бедствий; лишенный силы и власти, изобличенный в злодействах и коварствах, он бы должен был представляться им таким, каким он представлялся им десять лет тому назад и год после, – разбойником вне закона. Но по какой то странной случайности никто не видит этого. Роль его еще не кончена. Человека, которого десять лет тому назад и год после считали разбойником вне закона, посылают в два дня переезда от Франции на остров, отдаваемый ему во владение с гвардией и миллионами, которые платят ему за что то.


Движение народов начинает укладываться в свои берега. Волны большого движения отхлынули, и на затихшем море образуются круги, по которым носятся дипломаты, воображая, что именно они производят затишье движения.
Но затихшее море вдруг поднимается. Дипломатам кажется, что они, их несогласия, причиной этого нового напора сил; они ждут войны между своими государями; положение им кажется неразрешимым. Но волна, подъем которой они чувствуют, несется не оттуда, откуда они ждут ее. Поднимается та же волна, с той же исходной точки движения – Парижа. Совершается последний отплеск движения с запада; отплеск, который должен разрешить кажущиеся неразрешимыми дипломатические затруднения и положить конец воинственному движению этого периода.
Человек, опустошивший Францию, один, без заговора, без солдат, приходит во Францию. Каждый сторож может взять его; но, по странной случайности, никто не только не берет, но все с восторгом встречают того человека, которого проклинали день тому назад и будут проклинать через месяц.
Человек этот нужен еще для оправдания последнего совокупного действия.
Действие совершено. Последняя роль сыграна. Актеру велено раздеться и смыть сурьму и румяны: он больше не понадобится.
И проходят несколько лет в том, что этот человек, в одиночестве на своем острове, играет сам перед собой жалкую комедию, мелочно интригует и лжет, оправдывая свои деяния, когда оправдание это уже не нужно, и показывает всему миру, что такое было то, что люди принимали за силу, когда невидимая рука водила им.
Распорядитель, окончив драму и раздев актера, показал его нам.
– Смотрите, чему вы верили! Вот он! Видите ли вы теперь, что не он, а Я двигал вас?
Но, ослепленные силой движения, люди долго не понимали этого.
Еще большую последовательность и необходимость представляет жизнь Александра I, того лица, которое стояло во главе противодвижения с востока на запад.
Что нужно для того человека, который бы, заслоняя других, стоял во главе этого движения с востока на запад?
Нужно чувство справедливости, участие к делам Европы, но отдаленное, не затемненное мелочными интересами; нужно преобладание высоты нравственной над сотоварищами – государями того времени; нужна кроткая и привлекательная личность; нужно личное оскорбление против Наполеона. И все это есть в Александре I; все это подготовлено бесчисленными так называемыми случайностями всей его прошедшей жизни: и воспитанием, и либеральными начинаниями, и окружающими советниками, и Аустерлицем, и Тильзитом, и Эрфуртом.
Во время народной войны лицо это бездействует, так как оно не нужно. Но как скоро является необходимость общей европейской войны, лицо это в данный момент является на свое место и, соединяя европейские народы, ведет их к цели.
Цель достигнута. После последней войны 1815 года Александр находится на вершине возможной человеческой власти. Как же он употребляет ее?
Александр I, умиротворитель Европы, человек, с молодых лет стремившийся только к благу своих народов, первый зачинщик либеральных нововведений в своем отечестве, теперь, когда, кажется, он владеет наибольшей властью и потому возможностью сделать благо своих народов, в то время как Наполеон в изгнании делает детские и лживые планы о том, как бы он осчастливил человечество, если бы имел власть, Александр I, исполнив свое призвание и почуяв на себе руку божию, вдруг признает ничтожность этой мнимой власти, отворачивается от нее, передает ее в руки презираемых им и презренных людей и говорит только:
– «Не нам, не нам, а имени твоему!» Я человек тоже, как и вы; оставьте меня жить, как человека, и думать о своей душе и о боге.

Как солнце и каждый атом эфира есть шар, законченный в самом себе и вместе с тем только атом недоступного человеку по огромности целого, – так и каждая личность носит в самой себе свои цели и между тем носит их для того, чтобы служить недоступным человеку целям общим.
Пчела, сидевшая на цветке, ужалила ребенка. И ребенок боится пчел и говорит, что цель пчелы состоит в том, чтобы жалить людей. Поэт любуется пчелой, впивающейся в чашечку цветка, и говорит, цель пчелы состоит во впивании в себя аромата цветов. Пчеловод, замечая, что пчела собирает цветочную пыль к приносит ее в улей, говорит, что цель пчелы состоит в собирании меда. Другой пчеловод, ближе изучив жизнь роя, говорит, что пчела собирает пыль для выкармливанья молодых пчел и выведения матки, что цель ее состоит в продолжении рода. Ботаник замечает, что, перелетая с пылью двудомного цветка на пестик, пчела оплодотворяет его, и ботаник в этом видит цель пчелы. Другой, наблюдая переселение растений, видит, что пчела содействует этому переселению, и этот новый наблюдатель может сказать, что в этом состоит цель пчелы. Но конечная цель пчелы не исчерпывается ни тою, ни другой, ни третьей целью, которые в состоянии открыть ум человеческий. Чем выше поднимается ум человеческий в открытии этих целей, тем очевиднее для него недоступность конечной цели.
Человеку доступно только наблюдение над соответственностью жизни пчелы с другими явлениями жизни. То же с целями исторических лиц и народов.


Свадьба Наташи, вышедшей в 13 м году за Безухова, было последнее радостное событие в старой семье Ростовых. В тот же год граф Илья Андреевич умер, и, как это всегда бывает, со смертью его распалась старая семья.
События последнего года: пожар Москвы и бегство из нее, смерть князя Андрея и отчаяние Наташи, смерть Пети, горе графини – все это, как удар за ударом, падало на голову старого графа. Он, казалось, не понимал и чувствовал себя не в силах понять значение всех этих событий и, нравственно согнув свою старую голову, как будто ожидал и просил новых ударов, которые бы его покончили. Он казался то испуганным и растерянным, то неестественно оживленным и предприимчивым.
Свадьба Наташи на время заняла его своей внешней стороной. Он заказывал обеды, ужины и, видимо, хотел казаться веселым; но веселье его не сообщалось, как прежде, а, напротив, возбуждало сострадание в людях, знавших и любивших его.
После отъезда Пьера с женой он затих и стал жаловаться на тоску. Через несколько дней он заболел и слег в постель. С первых дней его болезни, несмотря на утешения докторов, он понял, что ему не вставать. Графиня, не раздеваясь, две недели провела в кресле у его изголовья. Всякий раз, как она давала ему лекарство, он, всхлипывая, молча целовал ее руку. В последний день он, рыдая, просил прощения у жены и заочно у сына за разорение именья – главную вину, которую он за собой чувствовал. Причастившись и особоровавшись, он тихо умер, и на другой день толпа знакомых, приехавших отдать последний долг покойнику, наполняла наемную квартиру Ростовых. Все эти знакомые, столько раз обедавшие и танцевавшие у него, столько раз смеявшиеся над ним, теперь все с одинаковым чувством внутреннего упрека и умиления, как бы оправдываясь перед кем то, говорили: «Да, там как бы то ни было, а прекрасжейший был человек. Таких людей нынче уж не встретишь… А у кого ж нет своих слабостей?..»
Именно в то время, когда дела графа так запутались, что нельзя было себе представить, чем это все кончится, если продолжится еще год, он неожиданно умер.
Николай был с русскими войсками в Париже, когда к нему пришло известие о смерти отца. Он тотчас же подал в отставку и, не дожидаясь ее, взял отпуск и приехал в Москву. Положение денежных дел через месяц после смерти графа совершенно обозначилось, удивив всех громадностию суммы разных мелких долгов, существования которых никто и не подозревал. Долгов было вдвое больше, чем имения.
Родные и друзья советовали Николаю отказаться от наследства. Но Николай в отказе от наследства видел выражение укора священной для него памяти отца и потому не хотел слышать об отказе и принял наследство с обязательством уплаты долгов.
Кредиторы, так долго молчавшие, будучи связаны при жизни графа тем неопределенным, но могучим влиянием, которое имела на них его распущенная доброта, вдруг все подали ко взысканию. Явилось, как это всегда бывает, соревнование – кто прежде получит, – и те самые люди, которые, как Митенька и другие, имели безденежные векселя – подарки, явились теперь самыми требовательными кредиторами. Николаю не давали ни срока, ни отдыха, и те, которые, по видимому, жалели старика, бывшего виновником их потери (если были потери), теперь безжалостно накинулись на очевидно невинного перед ними молодого наследника, добровольно взявшего на себя уплату.
Ни один из предполагаемых Николаем оборотов не удался; имение с молотка было продано за полцены, а половина долгов оставалась все таки не уплаченною. Николай взял предложенные ему зятем Безуховым тридцать тысяч для уплаты той части долгов, которые он признавал за денежные, настоящие долги. А чтобы за оставшиеся долги не быть посаженным в яму, чем ему угрожали кредиторы, он снова поступил на службу.
Ехать в армию, где он был на первой вакансии полкового командира, нельзя было потому, что мать теперь держалась за сына, как за последнюю приманку жизни; и потому, несмотря на нежелание оставаться в Москве в кругу людей, знавших его прежде, несмотря на свое отвращение к статской службе, он взял в Москве место по статской части и, сняв любимый им мундир, поселился с матерью и Соней на маленькой квартире, на Сивцевом Вражке.
Наташа и Пьер жили в это время в Петербурге, не имея ясного понятия о положении Николая. Николай, заняв у зятя деньги, старался скрыть от него свое бедственное положение. Положение Николая было особенно дурно потому, что своими тысячью двумястами рублями жалованья он не только должен был содержать себя, Соню и мать, но он должен был содержать мать так, чтобы она не замечала, что они бедны. Графиня не могла понять возможности жизни без привычных ей с детства условий роскоши и беспрестанно, не понимая того, как это трудно было для сына, требовала то экипажа, которого у них не было, чтобы послать за знакомой, то дорогого кушанья для себя и вина для сына, то денег, чтобы сделать подарок сюрприз Наташе, Соне и тому же Николаю.
Соня вела домашнее хозяйство, ухаживала за теткой, читала ей вслух, переносила ее капризы и затаенное нерасположение и помогала Николаю скрывать от старой графини то положение нужды, в котором они находились. Николай чувствовал себя в неоплатном долгу благодарности перед Соней за все, что она делала для его матери, восхищался ее терпением и преданностью, но старался отдаляться от нее.
Он в душе своей как будто упрекал ее за то, что она была слишком совершенна, и за то, что не в чем было упрекать ее. В ней было все, за что ценят людей; но было мало того, что бы заставило его любить ее. И он чувствовал, что чем больше он ценит, тем меньше любит ее. Он поймал ее на слове, в ее письме, которым она давала ему свободу, и теперь держал себя с нею так, как будто все то, что было между ними, уже давным давно забыто и ни в каком случае не может повториться.
Положение Николая становилось хуже и хуже. Мысль о том, чтобы откладывать из своего жалованья, оказалась мечтою. Он не только не откладывал, но, удовлетворяя требования матери, должал по мелочам. Выхода из его положения ему не представлялось никакого. Мысль о женитьбе на богатой наследнице, которую ему предлагали его родственницы, была ему противна. Другой выход из его положения – смерть матери – никогда не приходила ему в голову. Он ничего не желал, ни на что не надеялся; и в самой глубине души испытывал мрачное и строгое наслаждение в безропотном перенесении своего положения. Он старался избегать прежних знакомых с их соболезнованием и предложениями оскорбительной помощи, избегал всякого рассеяния и развлечения, даже дома ничем не занимался, кроме раскладывания карт с своей матерью, молчаливыми прогулками по комнате и курением трубки за трубкой. Он как будто старательно соблюдал в себе то мрачное настроение духа, в котором одном он чувствовал себя в состоянии переносить свое положение.


В начале зимы княжна Марья приехала в Москву. Из городских слухов она узнала о положении Ростовых и о том, как «сын жертвовал собой для матери», – так говорили в городе.
«Я и не ожидала от него другого», – говорила себе княжна Марья, чувствуя радостное подтверждение своей любви к нему. Вспоминая свои дружеские и почти родственные отношения ко всему семейству, она считала своей обязанностью ехать к ним. Но, вспоминая свои отношения к Николаю в Воронеже, она боялась этого. Сделав над собой большое усилие, она, однако, через несколько недель после своего приезда в город приехала к Ростовым.
Николай первый встретил ее, так как к графине можно было проходить только через его комнату. При первом взгляде на нее лицо Николая вместо выражения радости, которую ожидала увидать на нем княжна Марья, приняло невиданное прежде княжной выражение холодности, сухости и гордости. Николай спросил о ее здоровье, проводил к матери и, посидев минут пять, вышел из комнаты.
Когда княжна выходила от графини, Николай опять встретил ее и особенно торжественно и сухо проводил до передней. Он ни слова не ответил на ее замечания о здоровье графини. «Вам какое дело? Оставьте меня в покое», – говорил его взгляд.
– И что шляется? Чего ей нужно? Терпеть не могу этих барынь и все эти любезности! – сказал он вслух при Соне, видимо не в силах удерживать свою досаду, после того как карета княжны отъехала от дома.
– Ах, как можно так говорить, Nicolas! – сказала Соня, едва скрывая свою радость. – Она такая добрая, и maman так любит ее.
Николай ничего не отвечал и хотел бы вовсе не говорить больше о княжне. Но со времени ее посещения старая графиня всякий день по нескольку раз заговаривала о ней.


Источник — «http://wiki-org.ru/wiki/index.php?title=Флуоресценция_хлорофилла&oldid=79197275»