Аденоассоциированный вирус

Поделись знанием:
Перейти к: навигация, поиск
Аденоассоциированный вирус

Аденоассоциированные вирусы
Научная классификация
Международное научное название

Adeno-associated dependoparvovirus A

Синонимы

по данным ICTV[2]:

  • Adeno-associated virus 1
  • Adeno-associated virus 2
  • Adeno-associated virus 3
  • Adeno-associated virus 4
  • Adeno-associated virus 6
  • Adeno-associated virus-1
  • Adeno-associated virus-2
  • Adeno-associated virus-3
  • Adeno-associated virus-4
Группа по Балтимору

II: оцДНК-вирусы


Систематика
на Викивидах
Поиск изображений
на Викискладе
NCBI  [www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?mode=Info&id=1511891 1511891]

Аденоассоциированный вирус (англ. Adeno-associated dependoparvovirus A, AAV) — малый вирус, инфицирующий клетки человека и некоторых других приматов. Аденоассоциированный вирус, по-видимому, не вызывает заболевания у человека и, соответственно, вызывает слабый иммунный ответ.

Аденоассоциированный вирус может инфицировать делящиеся и неделящиеся клетки и может встраивать свой геном в геном хозяина. Эти особенности делают AAV особенно привлекательным кандидатом для создания вирусных векторов для генной терапии[3].

Аденоассоциированный вирус принадлежит к роду Dependoparvovirus семейства парвовирусов (Parvoviridae). Вирус имеет небольшие размеры (20 нм), не имеет липидной оболочки и не кодирует собственных ферментов репликации.





История

В 1965 году Роберт Атчисон опубликовал статью, в которой был описан новый вирус, названный аденоассоциированным вирусом[4]. Вирусные частицы были обнаружены при помощи электронной микроскопии в препаратах аденовируса обезьян, которые были несколько раз пересажены на первичных культурах клеток почки макаки резус. Группой Атчисона частицы нового вируса диаметром 24 нм были отделены от более крупных частиц аденовируса диаметром 80 нм при помощи ультрафильтрации[5].

После выделения было показано, что частично очищенные вирионы аденоассоциированного вируса не могут самостоятельно реплицироваться, однако могут реплицироваться и распространяться в культурах, зараженных аденовирусом. Таким образом, аденоассоциированный вирус оказался дефектным вирусом-спутником, нуждающимся во вспомогательном вирусе для полноценной репликации. Так как аденоассоциированной вирус не кодирует собственной ДНК-полимеразы, для размножения ему требуется вспомогательный вирус, как правило, аденовирус[6].

В июле 2013 года в результате ревизии семейства 4 близких вида объединили в один, сменив название рода на Dependoparvovirus, а вида — на Adeno-associated dependoparvovirus A[7].

Вектор для генной терапии

Преимущества и недостатки

Аденоассоциированный вирус дикого типа имеет некоторые преимущества для генной терапии. Одним из основных преимуществ является то, что этот вирус не является патогенным. Аденоассоциированный вирус может инфицировать неделящиеся клетки и может встраиваться в геном хозяина по специфическим участкам (AAVS1) девятнадцатой хромосомы[8].

Данная особенность делает аденоассоциированный вирус более предсказуемым, чем ретровирусы. Ретровирусы являются потенциально опасными как мутагены, так как встраиваются в геном хозяина случайным образом, что может привести к возникновению раковых опухолей. Геном аденоассоциированного вируса обычно встраивается по специфическому сайту, а случайные встраивания происходят с ничтожной частотой. При создании векторов для генной терапии на основе аденоассоциированного вируса из ДНК вируса удаляют гены rep и cap. Нужный ген вместе с промотором встраивают между инвертированными концевыми повторами (англ. inverted terminal repeats, ITR)), в результате чего в ядре после синтеза клеточной ДНК-полимеразой второй цепочки ДНК образуются конкатамеры. Векторы для генной терапии на основе аденоассоциированных вирусов образуют эписомальные конкатамеры в ядре клетки хозяина. В неделящихся клетках данные конкатамеры остаются интактными, в делящихся клетках ДНК аденоассоциированного вируса теряется при делениях клетки, так как эписомальная ДНК не реплицируется при репликации ДНК клетки хозяина. Случайное встраивание ДНК аденоассоциированного вируса в геном хозяина происходит весьма редко. Аденоассоциированный вирус также обладает очень низкой иммунногенностью, по-видимому, ограниченной низкой эффективностью образования нейтрализующих антител, в то время как для последних четко не показана цитотоксичность[9][10][11]. Описанные особенности, а также возможность заражать неделящиеся клетки, обуславливает преимущества аденоассоциированного вируса над аденовирусами для генной терапии.

Использование аденоассоциированного вируса имеет также и некоторые недостатки. Ёмкость генома вируса, доступная для клонирования терапевтических генов, составляет всего около 4800 пар нуклеотидов. Таким образом, данный вектор не подходит для клонирования крупных генов. Инвертированные концевые повторы двух геномов могут гибридизоваться и образовывать конкатамеры голова-хвост, практически удваивая ёмкость вектора.

Инфекция вирусом дикого типа часто вызывает активацию гуморального иммунитета. Активность нейтрализующих антител в некоторых случаях снижает применимость серотипа AAV2. AAV2 может проникать и в мозг и является строго специфичным к нейронам.

Клинические испытания

В настоящий момент препараты на основе аденоассоциированного вируса для лечения муковисцидоза и гемофилии проходят первый этап клинических испытаний. Многообещающие результаты были получены после первой фазы клинических испытаний препаратов против болезни Паркинсона. По результатам других клинических испытаний показана безопасность векторов на основе аденоассоциированного вируса при болезни Канавана, мышечной дистрофии и при синдроме Бильшовского-Янского (англ.).

Клинические испытания векторов на основе аденоассоциированного вируса[12]
Заболевание Ген Способ введения Фаза испытаний Количество испытуемых Статус
Муковисцидоз CFTR Легкие, аэрозоль I 12 Завершены
CFTR Легкие, аэрозоль II 38 Завершены
CFTR Легкие, аэрозоль II 100 Завершены
Гемофилия B FIX Внутримышечено I 9 Завершены
FIX Печеночная артерия I 6 Закончены
Артрит TNFR:Fc Внутрисуставно I 1 Продолжаются
Наследственная эмфизема AAT Внутримышечено I 12 Продолжаются
Мышечная дистрофия Саркогликан Внутримышечено I 10 Продолжаются
Болезнь Паркинсона GAD65, GAD67 Внутрь черепа I 12 Завершены[13]
Болезнь Канавана AAC Внутрь черепа I 21 Продолжаются
Болезнь Баттена CLN2 Внутрь черепа I 10 Продолжаются
Синдром Альцгеймера NGF Внутрь черепа I 6 Продолжаются

Клинические испытания для лечения рака простаты находятся уже в третьей стадии[12], однако, эти исследования ex vivo не включают прямого назначения аденоассоциированного вируса пациентам.

Патология

Считается, что аденоассоциированный вирус не вызывает заболеваний человека. Однако показано, что данный вирус является фактором риска развития мужского бесплодия[14]. Геномную ДНК аденоассоциированных вирусов обнаруживают в образцах спермы с нарушениями структуры и функции сперматозоидов. Однако, не выявлено прямой связи между данной инфекцией и мужским бесплодием.

Роль в развитии гепатоцеллюлярной карциномы

По результатам недавних исследований больных с редкими формами гепатоцеллюлярной карциномы, высказывается предположение, что вирус AAV2 может играть роль в пусковых механизмах развития этого вида рака. Поскольку мишенью вируса AAV2 являются гены, играющие важную роль в размножении клеток, исследователи полагают, что инфицирование приводит к их чрезмерной активации, в результате чего запускается опухолевый рост. Это открытие ставит под сомнение безопасность использования вирусов AAV2 для генной терапии.[15][16]

Структура

Геном, транскриптом и протеом

Геном аденоассоциированного вируса содержит (+ или -) одноцепочечную ДНК (ssDNA) длиной около 4,7 тысяч нуклеотидов. На концах молекулы геномной ДНК располагаются инвертированные концевые повторы (англ. inverted terminal repeats, ITRs). Геном содержит две открытые рамки считывания (англ. ORF): rep и cap. Первая содержит четыре перекрывающихся гена, кодирующих белки Rep, которые необходимы для жизненного цикла вируса, вторая рамка считывания содержит перекрывающиеся нуклеотидные последовательности белков капсида: VP1, VP2 и VP3, которые формируют икосаэдрическую головку капсида[17].

Инвертированные концевые повторы

Последовательность инвертированных концевых повторов (англ. Inverted Terminal Repeat, ITR) составляет 145 нуклеотидов. ITR располагаются симметрично в геноме аденоассоциированных вирусов и необходимы для репликации геномной ДНК[18]. Другим из свойств ITR является способность образовывать шпильки, что обеспечивает возможность синтеза второй цепочки ДНК без участия праймазы. Инвертированные концевые повторы также требуются для интеграции ДНК вируса в специфический участок девятнадцатой хромосомы человека и для освобождения ДНК провируса из хромосомы[19][20], а также для образования комплексов ДНК аденоассоциированного вируса с белками оболочки, устойчивых к действию дезоксирибонуклеазы[21].

В случае генной терапии в цис-положении после терапевтического гена должен находиться ITR. Эту закономерность используют при получении рекомбинантных векторов на основе аденоассоциированного вируса (англ. recombinant AAV, rAAV), содержащих репортерные или терапевтические гены. Показано, что ITR не требуются в цис-положении для осуществления репликации и укладки в капсид. В составе последовательности нуклеотидов гена rep обнаружен Rep-зависимый элемент, действующий в cis-положении (англ. cis-acting Rep-dependent element, CARE). В цис-положении CARE усиливает репликацию и сборку вирусных частиц[22][23][24][25].

Гены и белки rep

«Левая сторона генома» содержит два промотора — p5 и p19, с которых транскрибируются две перекрывающихся мРНК различной длины. Каждый ген, кодирующий соответствующую мРНК содержит интрон, который может быть вырезан в процессе сплайсинга. В результате этого могут синтезироваться четыре различных мРНК, и, соответственно, четыре различных белка Rep с перекрывающимися последовательностями. Белки названы в соответствии с их молекулярными массами в кДа: Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40[26]. Rep78 и 68 специфически связывают в качестве праймера шпильку, которую образуют инвертированные концевые повторы и затем разрезают её по сайту концевого разрешения (англ. terminal resolution site). Было показано, что Rep78 и 68 необходимы для специфической интеграции ДНК аденоассоциированного вируса в геном хозяина. Четыре белка Rep связывают АТР и обладают хеликазной активностью. Данные белки усиливают транскрипцию с промотора p40, но ослабляют транскрипцию с промоторов p5 и p19[20][26][27][28][29][30].

Гены cap и белки VP

«Правая часть» (+)-цепи геномной ДНК аденоассоциированного вируса содержит перекрывающиеся последовательности, кодирующие три белка капсида — VP1, VP2 и VP3. Транскрипция этих генов начинается с одного промотора, p40. Молекулярная масса соответствующих белков составляет 87, 72 и 62 кДа, соответственно[31]. Все три белка транслируются с одной мРНК. После транскрипции пре-мРНК может подвергаться сплайсингу двумя разными способами, при этом вырезается более длинный или более короткий интрон и образуются мРНК длиной 2300 или 2600 нуклеотидов. Обычно, особенно в присутствии аденовируса, вырезается более длинный интрон. В такой форме вырезается первый стартовый кодон AUG, с которого начинается синтез белка VP1, и уровень синтеза белка VP1 снижается. Первый кодон AUG, который остаётся в случае более длинного транскрипта, является стартовым кодоном для белка VP3. Однако, последовательность нуклеотидов, предшествующая этому кодону в пределах той же рамки считывания, содержит последовательность ACG, кодирующую треонин, которая окружена оптимальной последовательностью Козак . Это приводит к снижению синтеза белка VP2 (который представляет собой белок VP3 с дополнительными остатками аминокислот на N-конце[32][33][34][35].

Так как больший интрон предпочтительно вырезается из пре-мРНК и так как кодон ACG является более слабым стартовым кодоном, соответствующие белки in vivo экспрессируются в соотношении примерно 1:1:20, в таком же соотношении белки входят и в состав вирусной частицы[36]. Уникальный фрагмент на N-конце белка VP1 имеют активность фосфолипазы А2 (англ. PLA2), которая, вероятно, требуется для освобождения вирусных частиц из поздних эндосом[37]. Муралидар с соавторами показали, что белки VP2 и VP3 крайне необходимы для сборки вирусной частицы[34]. Уоррингтон с соавторами показали, что белок VP2 не является строго необходимым для сборки вирусной частицы, а также не влияет на патогенные свойства вируса. Однако, на функционирование белка VP2 не влияют значительные встройки в N-концевую часть, в то время как встройки в VP1 снижают его фосфолипазную активность[38].

Кристаллическая структура белка VP3 в 2002 году была определена исследователями Кси и Бью с соавторами[39].

Серотипы и рецепторы

К 2006 году были описаны 11 серотипов аденоассоциированного вируса[40]. Все известные серотипы могут инфицировать клетки многих видов тканей. Тканевая специфичность определяется серотипом белков капсида, поэтому векторы на основе аденоассоциированого вируса конструируют, задавая необходимый серотип.

Серотип 2

Серотип 2 аденоассоциированного вируса изучен наиболее подробно[41][42][43][44][45][46]. Аденоассоциированный вирус серотипа 2 обладает природным сродством к скелетным мышцам[47], нейронам[41], гладким мышцам сосудов[48] и гепатоцитам[49].

Для аденоассоциированного вируса серотипа 2 описан три клеточных рецептора: гепарансульфатпротеогликан (англ. HSPG), интегрин aVβ5 и рецептор 1 фактора роста фибробластов (англ. FGFR-1). Первый является первичным рецептором, последние два являются ко-рецепторами, и позволяют аденоассоциированному вирусу попадать в клетку путём рецептор-опосредованного эндоцитоза[50][51][52][53]. HSPG значительно представлен во внеклеточном веществе и действует как первичный рецептор, при этом очищая организм от частиц аденоассоциированного вируса и снижая эффективность заражения[54].

Исследования показали, что аденоассоциированный вирус серотипа 2 убивает раковые клетки, не повреждая при этом здоровые клетки. "Наши исследования показали, что аденоассоциированный вирус второго типа, который инфицирует большую часть популяции клеток, убивает многие типы раковых клеток, но не здоровые клетки, " сообщает [www.fred.psu.edu/ds/retrieve/fred/investigator/cmm10 Крейг Мейер], профессор иммунологии и микробиологии Медицинского колледжа Penn State в Пенсильвании[55]. Данные исследования могут привести к созданию новых противораковых препаратов.

Другие серотипы

Хотя аденоассоциированный вирус серотипа 2 является наиболее популярным серотипом в научных исследованиях, было показано, что другие серотипы могут быть более эффективными векторами для доставки генов. Например, аденоассоциированный вирус серотипа 6 лучше инфицирует клетки эпителия дыхательных путей, вирус серотипа 7 имеет очень высокий уровень трансдукции клеток скелетных мышц мыши, вируса серотипа 8 прекрасно трансдуцирует гепатоциты[56][57][58], а вирусы серотипа 1 и 5 очень эффективно доставляют гены в клетки эндотелия сосудов[59]. Аденоассоциированный вирус серотипа 6, являющийся гибридом серотипов 1 и 2[58], также обладает более низкой иммунногенностью, чем вирус серотипа 2[57].

Серотипы отличаются рецепторами, с которыми происходит их связывание. Например, трансдукция вирусами серотипов 4 и 5 может быть ингибирована раствором сиаловой кислоты[60], а вирус серотипа 5 проникает в клетки через рецептор фактора роста тромбоцитов[61].

Иммунный ответ

Аденоассоциированный вирус представляет особый интерес для генной терапии, ввиду ограниченной способности индуцировать иммунный ответ у человека. Эта особенность данного вируса делает его особенно удобным для трансдукции, так как снижает риск иммунных патологий.

Врожденный иммунитет

У животных показан врождённый иммунный ответ на аденоассоциированный вирус. Внутривенное введение вируса мышам вызывает образование цитокинов воспаления, инфильтрацию нейтрофилов и других лейкоцитов в печени, что, по-видимому, значительно снижает количество введенных вирусных частиц[62].

Гуморальный иммунитет

Показано, что вирус может вызывать гуморальный ответ как у животных, так и у человека. До 80 % человеческой популяции являются серопозитивными к серотипу 2. Показано, что нейтрализующие антитела могут снижать трансдукцию векторов на основе аденоассоциированного вируса при нескольких путях введения[63].

Клеточный иммунитет

Клеточный иммунный ответ к вирусу и векторам, созданным на основе вируса был недостаточно изучен до 2005 года[63]. Клинические исследования вектора на основе аденоассоциированного вируса серотипа 2 для лечения гемофилии В показали, что может происходить разрушение трансдуцированных клеток[64]. Исследования показали, что CD8+ T-лимфоциты могут распознавать элементы капсида аденоассоциированного вируса in vitro[65], что свидетельствует о потенциальной возможности цитотоксического ответа на векторы в отношении Т-лимфоцитов. Однако, данные исследования не закончены и возможность такого цитотоксического ответа полностью не изучена.

Жизненный цикл

В жизненном цикле аденоассоциированного вируса от стадии инфицирования клетки до образования новых вирусных частиц можно выделить несколько этапов:

  1. прикрепление к плазматической мембране
  2. эндоцитоз
  3. перемещение в составе эндосомы
  4. выход из поздней эндосомы или лизосомы
  5. перемещение в ядро клетки
  6. образование репликативной вирусной двуцепочечной ДНК
  7. экспрессия генов rep
  8. репликация геномной ДНК
  9. экспрессия генов cap, синтез дочерней одноцепочечной ДНК
  10. сборка вирионов
  11. высвобождение вирусных частиц из зараженной клетки

Некоторые из этих этапов могут отличаться в зависимости от типа клеток. Параметры репликации ДНК вируса могут также отличаться и среди клеток одного типа, в зависимости от стадии клеточного цикла[66].

Аденоассоциированный вирус не способен реплицироваться в клетках, которые не заражены аденовирусами. Эта особенность образовывать вирусные частицы свидетельствует о том, что аденоассоциированный вирус произошёл от аденовирусов. Показано, что репликация ДНК аденоассоциированного вируса облегчается при наличии некоторых белков аденовирусов[67][68] или других вирусов, например простого герпеса[69], или генотоксичных агенов, таких, как ультрафиолетовое излучение или гидроксимочевина[70][71][72].

Минимальный набор генов аденовируса, необходимых для размножения аденоассоциированных вирусов был описан Матсушитой и Эллингером с соавторами[67]. Данное открытие позволило создать рекомбинантные аденоассоциированные вирусы, которым не требуется ко-инфицирование аденовирусом. В отсутствие вспомогательных вирусов или гентоксичных факторов, ДНК аденоассоциированного вируса может встраиваться в геном хозяина в эписомальной форме. В первом случае интеграция в геном хозяина осуществляется белками Rep78 и Rep68 и требует наличия инвертированных концевых повторов (англ. ITR) фланкирующих встраиваемую последовательность. У мышей геном аденоассоциированного вируса может находиться в виде эписомы (кольцевой ДНК, в ориентации голова-хвост) в неделящихся тканях—например, в скелетных мышцах[73].

См. также

Напишите отзыв о статье "Аденоассоциированный вирус"

Примечания

  1. ↑ [ictvonline.org/virusTaxonomy.asp Таксономия вирусов] на сайте Международного комитета по таксономии вирусов (ICTV) (англ.)
  2. ↑ [ictvonline.org/taxonomyHistory.asp?taxnode_id=20153520&taxa_name=Adeno-associated%20dependoparvovirus%20A ICTV Taxonomy History for Adeno-associated dependoparvovirus A] на сайте ICTV (англ.) (Проверено 13 июля 2016).
  3. ↑ Grieger, JC & Samulski, RJ (2005), "Adeno-associated virus as a gene therapy vector: vector development, production and clinical applications.", Advances in biochemical engineering/biotechnology (Berlin, Germany) (no. 99): 119-145, PMID 16568890 
  4. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM Adenovirus-associated defective virus particles // Science. — 1965. — Т. 149. — С. 754-756.
  5. ↑ Smith R. H. Adeno-associeated virus integration: virus versus vector // Gene Therapy. — 2008. — Т. 15, № 11. — С. 817—822. — DOI:10.1038/gt.2008.55.
  6. ↑ Ni T-H, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N Cellular proteins required for adeno-associated virus DNA replication in the absence of adenovirus coinfection // J Virol. — 1998. — Т. 72. — С. 2777—2787.
  7. ↑ [ictvonline.org/proposals/2013.001a-aaaV.A.v4.Parvoviridae.pdf Rationalization and extension of the taxonomy of the family Parvoviridae] : [англ.] // ICTVonline. — Code assigned: 2013.001a-aaaV. — 2013. — P. 20—21.</span>
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, SG et al. (1997), "Adeno-associated virus Rep proteins target DNA sequences to a unique locus in the human genome", Journal of virology Т. 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K & Magosin, S et al. (1999), "Immune responses to adenovirus and adeno-associated virus in humans", Gene therapy (no. September): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, WG et al. (1999), "Latent adeno-associated virus infection elicits humoral but not cell-mediated immune responses in a nonhuman primate model", Journal of virology (no. October): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC et al. (1997), "Adeno-associated virus 2-mediated gene transfer in vivo: organ-tropism and expression of transduced sequences in mice", Gene (no. Apr 29): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), "Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials", Human Gene Therapy Т. 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, MG; Feigin, A; During, MJ & others (2007), "Safety and tolerability of gene therapy with an adeno-associated virus (AAV) borne GAD gene for Parkinson's disease: an open label, phase I trial", Lancet Т. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K, Rohde V, Thaele M, Roth S, Edler L, Schlehofer JR (November 2001). «[humrep.oxfordjournals.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=11679515 DNA of adeno-associated virus (AAV) in testicular tissue and in abnormal semen samples]». Hum. Reprod. 16 (11): 2333–7. PMID 11679515.
  15. ↑ [cancerres.aacrjournals.org/content/75/15_Supplement/919.short#aff-1 Nault J. C. et al. Recurrent AAV2-related insertional mutagenesis in human hepatocellular carcinomas // Nature genetics. — 2015.]</span>
  16. ↑ [www.euroonco.ru/science-news/novyj-virus-raka-pecheni Новый вирус рака печени] (рус.). Проверено 24 октября 2015.
  17. ↑ Carter, BJ (2000), "Adeno-associated virus and adeno-associated virus vectors for gene delivery", in DD Lassic & N Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies, New York City: Marcel Dekker, Inc., сс. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  18. ↑ Bohenzky, RA; LeFebvre, RB & Berns, KI (1988), "Sequence and symmetry requirements within the internal palindromic sequences of the adeno-associated virus terminal repeat", Virology (San Diego: Academic Press) . — Т. 166 (2), PMID 2845646 
  19. ↑ Wang, X.S.; Ponnazhagan & Srivastava (1995), "Rescue and replication signals of the adeno-associated virus 2 genome", Journal of Molecular Biology Т. 250: 573-80, PMID 7623375 
  20. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, SR; Kotin, RM & Owens, RA (1994), "Adeno-associated virus (AAV) Rep proteins mediate complex formation between AAV DNA and its integration site in human DNA", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 91 (13): 5808-12, PMID 8016070 
  21. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), "In vitro packaging of adeno-associated virus DNA", Journal of virology Т. 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  22. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P et al. (2001), "Novel cis-acting replication element in the adeno-associated virus type 2 genome is involved in amplification of integrated rep-cap sequences", Journal of virology Т. 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  23. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P et al. (2003), "Evidence for packaging of rep-cap sequences into adeno- associated virus (AAV) type 2 capsids in the absence of inverted terminal repeats: a model for generation of rep-positive AAV particles", Journal of virology Т. 77, PMID 12477885 
  24. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J et al. (2002), "Efficient integration of recombinant adeno-associated virus DNA vectors requires a p5-rep sequence in cis", Journal of virology Т. 76 (11), PMID 11991970 
  25. ↑ Tullis, GE & Shenk, T (2000), "Efficient replication of adeno-associated virus type 2 vectors: a cis-acting element outside of the terminal repeats and a minimal size", Journal of virology Т. 74 (24), PMID 11090148 
  26. ↑ 1 2 Kyostio, SR; Owens, RA; Weitzman, MD & Antoni, BA et al. (1994), "Analysis of adeno-associated virus (AAV) wild-type and mutant Rep proteins for their abilities to negatively regulate AAV p5 and p19 mRNA levels", Journal of virology Т. 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  27. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), "The AAV origin binding protein Rep68 is an ATP-dependent site-specific endonuclease with DNA helicase activity.", Cell Т. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  28. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1992), "Partial purification of adeno-associated virus Rep78, Rep52, and Rep40 and their biochemical characterization", Journal of virology Т. 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  29. ↑ Samulski, RJ (2003), "AAV vectors, the future workhorse of human gene therapy", Ernst Schering Research Foundation workshop (no. 43): 25-40, PMID 12894449 
  30. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988a), "Regulation of adeno-associated virus gene expression in 293 cells: control of mRNA abundance and translation", Journal of virology (no. 1): 68-74, PMID 2824856 
  31. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), "Eukaryotic translational control: adeno-associated virus protein synthesis is affected by a mutation in the adenovirus DNA-binding protein", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  32. ↑ Becerra, SP; Rose, JA; Hardy, M & other (1985), "Direct mapping of adeno-associated virus capsid proteins B and C: a possible ACG initiation codon", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 82 (23): 7919-23, PMID 2999784 
  33. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), "Organization of the adeno-associated virus (AAV) capsid gene: mapping of a minor spliced mRNA coding for virus capsid protein 1", Virology Т. 167 (1): 176-84, PMID 2847413 
  34. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), "Site-directed mutagenesis of adeno-associated virus type 2 structural protein initiation codons: effects on regulation of synthesis and biological activity", Journal of virology Т. 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  35. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988b), "Alternate mRNA splicing is required for synthesis of adeno-associated virus VP1 capsid protein", Journal of virology Т. 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  36. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), "Building a better vector: the manipulation of AAV virions", Virology Т. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  37. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z & others (2002), "The VP1 capsid protein of adeno-associated virus type 2 is carrying a phospholipase A2 domain required for virus infectivity", The Journal of general virology Т. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  38. ↑ Warrington, KH,Jr; Gorbatyuk, OS; Harrison, JK & others (2004), "Adeno-associated virus type 2 VP2 capsid protein is nonessential and can tolerate large peptide insertions at its N terminus", Journal of virology Т. 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  39. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S & others (2002), "The atomic structure of adeno-associated virus (AAV-2), a vector for human gene therapy", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 99 (16): 10405-10, PMID 12136130 
  40. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), "Two novel adeno-associated viruses from cynomolgus monkey: pseudotyping characterization of capsid protein", Virology Т. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  41. ↑ 1 2 Bartlett, JS; Samulski, RJ; McCown, TJ & others (1998), "Selective and rapid uptake of adeno-associated virus type 2 in brain", Human gene therapy Т. 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  42. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI & others (2003), "Successful transgene expression with serial doses of aerosolized rAAV2 vectors in rhesus macaques", Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy Т. 8 (6): 918-26, PMID 14664794 
  43. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL & others (2001), "Efficient and selective AAV2-mediated gene transfer directed to human vascular endothelial cells", Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy Т. 4 (3): 174-81, PMID 11545607 
  44. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), "Insertional mutagenesis of AAV2 capsid and the production of recombinant virus", Virology Т. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  45. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), "RGD inclusion in VP3 provides adeno-associated virus type 2 (AAV2)-based vectors with a heparan sulfate-independent cell entry mechanism", Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy Т. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  46. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T & others (2000), "Mutational analysis of the adeno-associated virus type 2 (AAV2) capsid gene and construction of AAV2 vectors with altered tropism", Journal of virology Т. 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  47. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S & others (2003), "AAV-mediated factor IX gene transfer to skeletal muscle in patients with severe hemophilia B", Blood Т. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  48. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J & others (2000), "Adeno-associated virus vector transduction of vascular smooth muscle cells in vivo", Physiological genomics Т. 2 (3): 117-27, PMID 11015590 
  49. ↑ Koeberl, DD; Alexander, IE; Halbert, CL & others (1997), "Persistent expression of human clotting factor IX from mouse liver after intravenous injection of adeno-associated virus vectors", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 94 (4): 1426-31, PMID 9037069 
  50. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J & other (1999), "Human fibroblast growth factor receptor 1 is a co-receptor for infection by adeno-associated virus 2", Nature medicine Т. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  51. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), "Membrane-associated heparan sulfate proteoglycan is a receptor for adeno-associated virus type 2 virions", Journal of virology Т. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  52. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS & Samulski, RJ (1999), "AlphaVbeta5 integrin: a co-receptor for adeno-associated virus type 2 infection", Nature medicine Т. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  53. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), "The interaction of heparin sulfate and adeno-associated virus 2", Virology Т. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  54. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H & other (2002), "Cell-type-specific characteristics modulate the transduction efficiency of adeno-associated virus type 2 and restrain infection of endothelial cells", Journal of virology Т. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  55. ↑ CNN.com (2005), [www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html Common virus 'kills cancer'], <www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html> 
  56. ↑ Gao, GP; Alvira, MR; Wang, L & other (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Т. 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  57. ↑ 1 2 Halbert, CL; Allen, JM & Miller, AD (2001), "Adeno-associated virus type 6 (AAV6) vectors mediate efficient transduction of airway epithelial cells in mouse lungs compared to that of AAV2 vectors", Journal of virology. (J Virol) Jul; (): Т. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  58. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, DE; Faust, SM & other (2004), "Cross-dressing the virion: the transcapsidation of adeno-associated virus serotypes functionally defines subgroups", Journal of virology Т. 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  59. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA & others (2005), "Efficient transduction of vascular endothelial cells with recombinant adeno-associated virus serotype 1 and 5 vectors", Human gene therapy Т. 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  60. ↑ Kaludov, N; Brown, KE; Walters, RW & others (2001), "Adeno-associated virus serotype 4 (AAV4) and AAV5 both require sialic acid binding for hemagglutination and efficient transduction but differ in sialic acid linkage specificity", Journal of virology Т. 75 (15): 6884-93, PMID 11435568 
  61. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, BL; Stein, CS & others, "Identification of PDGFR as a receptor for AAV-5 transduction", Nature medicine Т. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  62. ↑ Zaiss, AK; Liu, Q; Bowen, GP & others (2002), "Differential Activation of Innate Immune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors", Journal of Virology Т. 76 (9): 4580-90, PMID 11932423 
  63. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), "Immune responses to adeno-associated virus vectors", Current Gene Therapy Т. 5 (3): 323-31, PMID 15975009 
  64. ↑ High, KA; Mannos, CS; Pierce, GF & Others (2006), "Successful transduction of liver in hemophilia by AAV-Factor IX and limitations imposed by the host immune response", Nature Medicine Т. 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  65. ↑ High, KA; Sabatino, DE; Mingozzi, F & Others (2005), "Identification of Mouse AAV Capsid-Specific CD8+ T Cell Epitopes", Molecular Therapy Т. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  66. ↑ Rohr, UP; Kronenwett, R; Grimm, D & others (2002), "Primary human cells differ in their susceptibility to rAAV-2-mediated gene transfer and duration of reporter gene expression", Journal of virological methods Т. 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  67. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C & others (1998), "Adeno-associated virus vectors can be efficiently produced without helper virus", Gene therapy Т. 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  68. ↑ Myers, MW; Laughlin, CA; Jay, FT & other (1980), "Adenovirus helper function for growth of adeno-associated virus: effect of temperature- sensitive mutations in adenovirus early gene region 2", Journal of virology Т. 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  69. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), "Adeno-associated virus DNA replication complexes in herpes simplex virus or adenovirus-infected cells", The Journal of biological chemistry Т. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  70. ↑ Yalkinoglu, AO; Heilbronn, R; Bürkle, A & other (1988), "DNA amplification of adeno-associated virus as a response to cellular genotoxic stress", Cancer research Т. 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  71. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), "Replication of adeno-associated virus in synchronized cells without the addition of a helper virus", Journal of virology Т. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  72. ↑ Yakobson, B; Hrynko, TA; Peak, MJ & Winocour, E (1989), "Replication of adeno-associated virus in cells irradiated with UV light at 254 nm", Journal of virology Т. 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  73. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J & others (1998), "Circular intermediates of recombinant adeno-associated virus have defined structural characteristics responsible for long-term episomal persistence in muscle tissue", Journal of virology Т. 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 

    74. </ol>

Литература

  • Шахбазов А.В., Северин И.Н., Гончарова Н.В., Гринев В.В., Космачева С.М., Потапнев М.П. Вирусные векторы для стабильной трансдукции мезенхимальных стволовых клеток человека: системы на основе аденоассоциированных вирусов и лентивирусов // Клеточные технологии в биологии и медицине. — 2008. — Т. 4. — С. 216—218.


Отрывок, характеризующий Аденоассоциированный вирус

Перед зарею задремавшего графа Орлова разбудили. Привели перебежчика из французского лагеря. Это был польский унтер офицер корпуса Понятовского. Унтер офицер этот по польски объяснил, что он перебежал потому, что его обидели по службе, что ему давно бы пора быть офицером, что он храбрее всех и потому бросил их и хочет их наказать. Он говорил, что Мюрат ночует в версте от них и что, ежели ему дадут сто человек конвою, он живьем возьмет его. Граф Орлов Денисов посоветовался с своими товарищами. Предложение было слишком лестно, чтобы отказаться. Все вызывались ехать, все советовали попытаться. После многих споров и соображений генерал майор Греков с двумя казачьими полками решился ехать с унтер офицером.
– Ну помни же, – сказал граф Орлов Денисов унтер офицеру, отпуская его, – в случае ты соврал, я тебя велю повесить, как собаку, а правда – сто червонцев.
Унтер офицер с решительным видом не отвечал на эти слова, сел верхом и поехал с быстро собравшимся Грековым. Они скрылись в лесу. Граф Орлов, пожимаясь от свежести начинавшего брезжить утра, взволнованный тем, что им затеяно на свою ответственность, проводив Грекова, вышел из леса и стал оглядывать неприятельский лагерь, видневшийся теперь обманчиво в свете начинавшегося утра и догоравших костров. Справа от графа Орлова Денисова, по открытому склону, должны были показаться наши колонны. Граф Орлов глядел туда; но несмотря на то, что издалека они были бы заметны, колонн этих не было видно. Во французском лагере, как показалось графу Орлову Денисову, и в особенности по словам его очень зоркого адъютанта, начинали шевелиться.
– Ах, право, поздно, – сказал граф Орлов, поглядев на лагерь. Ему вдруг, как это часто бывает, после того как человека, которому мы поверим, нет больше перед глазами, ему вдруг совершенно ясно и очевидно стало, что унтер офицер этот обманщик, что он наврал и только испортит все дело атаки отсутствием этих двух полков, которых он заведет бог знает куда. Можно ли из такой массы войск выхватить главнокомандующего?
– Право, он врет, этот шельма, – сказал граф.
– Можно воротить, – сказал один из свиты, который почувствовал так же, как и граф Орлов Денисов, недоверие к предприятию, когда посмотрел на лагерь.
– А? Право?.. как вы думаете, или оставить? Или нет?
– Прикажете воротить?
– Воротить, воротить! – вдруг решительно сказал граф Орлов, глядя на часы, – поздно будет, совсем светло.
И адъютант поскакал лесом за Грековым. Когда Греков вернулся, граф Орлов Денисов, взволнованный и этой отмененной попыткой, и тщетным ожиданием пехотных колонн, которые все не показывались, и близостью неприятеля (все люди его отряда испытывали то же), решил наступать.
Шепотом прокомандовал он: «Садись!» Распределились, перекрестились…
– С богом!
«Урааааа!» – зашумело по лесу, и, одна сотня за другой, как из мешка высыпаясь, полетели весело казаки с своими дротиками наперевес, через ручей к лагерю.
Один отчаянный, испуганный крик первого увидавшего казаков француза – и все, что было в лагере, неодетое, спросонков бросило пушки, ружья, лошадей и побежало куда попало.
Ежели бы казаки преследовали французов, не обращая внимания на то, что было позади и вокруг них, они взяли бы и Мюрата, и все, что тут было. Начальники и хотели этого. Но нельзя было сдвинуть с места казаков, когда они добрались до добычи и пленных. Команды никто не слушал. Взято было тут же тысяча пятьсот человек пленных, тридцать восемь орудий, знамена и, что важнее всего для казаков, лошади, седла, одеяла и различные предметы. Со всем этим надо было обойтись, прибрать к рукам пленных, пушки, поделить добычу, покричать, даже подраться между собой: всем этим занялись казаки.
Французы, не преследуемые более, стали понемногу опоминаться, собрались командами и принялись стрелять. Орлов Денисов ожидал все колонны и не наступал дальше.
Между тем по диспозиции: «die erste Colonne marschiert» [первая колонна идет (нем.) ] и т. д., пехотные войска опоздавших колонн, которыми командовал Бенигсен и управлял Толь, выступили как следует и, как всегда бывает, пришли куда то, но только не туда, куда им было назначено. Как и всегда бывает, люди, вышедшие весело, стали останавливаться; послышалось неудовольствие, сознание путаницы, двинулись куда то назад. Проскакавшие адъютанты и генералы кричали, сердились, ссорились, говорили, что совсем не туда и опоздали, кого то бранили и т. д., и наконец, все махнули рукой и пошли только с тем, чтобы идти куда нибудь. «Куда нибудь да придем!» И действительно, пришли, но не туда, а некоторые туда, но опоздали так, что пришли без всякой пользы, только для того, чтобы в них стреляли. Толь, который в этом сражении играл роль Вейротера в Аустерлицком, старательно скакал из места в место и везде находил все навыворот. Так он наскакал на корпус Багговута в лесу, когда уже было совсем светло, а корпус этот давно уже должен был быть там, с Орловым Денисовым. Взволнованный, огорченный неудачей и полагая, что кто нибудь виноват в этом, Толь подскакал к корпусному командиру и строго стал упрекать его, говоря, что за это расстрелять следует. Багговут, старый, боевой, спокойный генерал, тоже измученный всеми остановками, путаницами, противоречиями, к удивлению всех, совершенно противно своему характеру, пришел в бешенство и наговорил неприятных вещей Толю.
– Я уроков принимать ни от кого не хочу, а умирать с своими солдатами умею не хуже другого, – сказал он и с одной дивизией пошел вперед.
Выйдя на поле под французские выстрелы, взволнованный и храбрый Багговут, не соображая того, полезно или бесполезно его вступление в дело теперь, и с одной дивизией, пошел прямо и повел свои войска под выстрелы. Опасность, ядра, пули были то самое, что нужно ему было в его гневном настроении. Одна из первых пуль убила его, следующие пули убили многих солдат. И дивизия его постояла несколько времени без пользы под огнем.


Между тем с фронта другая колонна должна была напасть на французов, но при этой колонне был Кутузов. Он знал хорошо, что ничего, кроме путаницы, не выйдет из этого против его воли начатого сражения, и, насколько то было в его власти, удерживал войска. Он не двигался.
Кутузов молча ехал на своей серенькой лошадке, лениво отвечая на предложения атаковать.
– У вас все на языке атаковать, а не видите, что мы не умеем делать сложных маневров, – сказал он Милорадовичу, просившемуся вперед.
– Не умели утром взять живьем Мюрата и прийти вовремя на место: теперь нечего делать! – отвечал он другому.
Когда Кутузову доложили, что в тылу французов, где, по донесениям казаков, прежде никого не было, теперь было два батальона поляков, он покосился назад на Ермолова (он с ним не говорил еще со вчерашнего дня).
– Вот просят наступления, предлагают разные проекты, а чуть приступишь к делу, ничего не готово, и предупрежденный неприятель берет свои меры.
Ермолов прищурил глаза и слегка улыбнулся, услыхав эти слова. Он понял, что для него гроза прошла и что Кутузов ограничится этим намеком.
– Это он на мой счет забавляется, – тихо сказал Ермолов, толкнув коленкой Раевского, стоявшего подле него.
Вскоре после этого Ермолов выдвинулся вперед к Кутузову и почтительно доложил:
– Время не упущено, ваша светлость, неприятель не ушел. Если прикажете наступать? А то гвардия и дыма не увидит.
Кутузов ничего не сказал, но когда ему донесли, что войска Мюрата отступают, он приказал наступленье; но через каждые сто шагов останавливался на три четверти часа.
Все сраженье состояло только в том, что сделали казаки Орлова Денисова; остальные войска лишь напрасно потеряли несколько сот людей.
Вследствие этого сражения Кутузов получил алмазный знак, Бенигсен тоже алмазы и сто тысяч рублей, другие, по чинам соответственно, получили тоже много приятного, и после этого сражения сделаны еще новые перемещения в штабе.
«Вот как у нас всегда делается, все навыворот!» – говорили после Тарутинского сражения русские офицеры и генералы, – точно так же, как и говорят теперь, давая чувствовать, что кто то там глупый делает так, навыворот, а мы бы не так сделали. Но люди, говорящие так, или не знают дела, про которое говорят, или умышленно обманывают себя. Всякое сражение – Тарутинское, Бородинское, Аустерлицкое – всякое совершается не так, как предполагали его распорядители. Это есть существенное условие.
Бесчисленное количество свободных сил (ибо нигде человек не бывает свободнее, как во время сражения, где дело идет о жизни и смерти) влияет на направление сражения, и это направление никогда не может быть известно вперед и никогда не совпадает с направлением какой нибудь одной силы.
Ежели многие, одновременно и разнообразно направленные силы действуют на какое нибудь тело, то направление движения этого тела не может совпадать ни с одной из сил; а будет всегда среднее, кратчайшее направление, то, что в механике выражается диагональю параллелограмма сил.
Ежели в описаниях историков, в особенности французских, мы находим, что у них войны и сражения исполняются по вперед определенному плану, то единственный вывод, который мы можем сделать из этого, состоит в том, что описания эти не верны.
Тарутинское сражение, очевидно, не достигло той цели, которую имел в виду Толь: по порядку ввести по диспозиции в дело войска, и той, которую мог иметь граф Орлов; взять в плен Мюрата, или цели истребления мгновенно всего корпуса, которую могли иметь Бенигсен и другие лица, или цели офицера, желавшего попасть в дело и отличиться, или казака, который хотел приобрести больше добычи, чем он приобрел, и т. д. Но, если целью было то, что действительно совершилось, и то, что для всех русских людей тогда было общим желанием (изгнание французов из России и истребление их армии), то будет совершенно ясно, что Тарутинское сражение, именно вследствие его несообразностей, было то самое, что было нужно в тот период кампании. Трудно и невозможно придумать какой нибудь исход этого сражения, более целесообразный, чем тот, который оно имело. При самом малом напряжении, при величайшей путанице и при самой ничтожной потере были приобретены самые большие результаты во всю кампанию, был сделан переход от отступления к наступлению, была обличена слабость французов и был дан тот толчок, которого только и ожидало наполеоновское войско для начатия бегства.


Наполеон вступает в Москву после блестящей победы de la Moskowa; сомнения в победе не может быть, так как поле сражения остается за французами. Русские отступают и отдают столицу. Москва, наполненная провиантом, оружием, снарядами и несметными богатствами, – в руках Наполеона. Русское войско, вдвое слабейшее французского, в продолжение месяца не делает ни одной попытки нападения. Положение Наполеона самое блестящее. Для того, чтобы двойными силами навалиться на остатки русской армии и истребить ее, для того, чтобы выговорить выгодный мир или, в случае отказа, сделать угрожающее движение на Петербург, для того, чтобы даже, в случае неудачи, вернуться в Смоленск или в Вильну, или остаться в Москве, – для того, одним словом, чтобы удержать то блестящее положение, в котором находилось в то время французское войско, казалось бы, не нужно особенной гениальности. Для этого нужно было сделать самое простое и легкое: не допустить войска до грабежа, заготовить зимние одежды, которых достало бы в Москве на всю армию, и правильно собрать находившийся в Москве более чем на полгода (по показанию французских историков) провиант всему войску. Наполеон, этот гениальнейший из гениев и имевший власть управлять армиею, как утверждают историки, ничего не сделал этого.
Он не только не сделал ничего этого, но, напротив, употребил свою власть на то, чтобы из всех представлявшихся ему путей деятельности выбрать то, что было глупее и пагубнее всего. Из всего, что мог сделать Наполеон: зимовать в Москве, идти на Петербург, идти на Нижний Новгород, идти назад, севернее или южнее, тем путем, которым пошел потом Кутузов, – ну что бы ни придумать, глупее и пагубнее того, что сделал Наполеон, то есть оставаться до октября в Москве, предоставляя войскам грабить город, потом, колеблясь, оставить или не оставить гарнизон, выйти из Москвы, подойти к Кутузову, не начать сражения, пойти вправо, дойти до Малого Ярославца, опять не испытав случайности пробиться, пойти не по той дороге, по которой пошел Кутузов, а пойти назад на Можайск и по разоренной Смоленской дороге, – глупее этого, пагубнее для войска ничего нельзя было придумать, как то и показали последствия. Пускай самые искусные стратегики придумают, представив себе, что цель Наполеона состояла в том, чтобы погубить свою армию, придумают другой ряд действий, который бы с такой же несомненностью и независимостью от всего того, что бы ни предприняли русские войска, погубил бы так совершенно всю французскую армию, как то, что сделал Наполеон.
Гениальный Наполеон сделал это. Но сказать, что Наполеон погубил свою армию потому, что он хотел этого, или потому, что он был очень глуп, было бы точно так же несправедливо, как сказать, что Наполеон довел свои войска до Москвы потому, что он хотел этого, и потому, что он был очень умен и гениален.
В том и другом случае личная деятельность его, не имевшая больше силы, чем личная деятельность каждого солдата, только совпадала с теми законами, по которым совершалось явление.
Совершенно ложно (только потому, что последствия не оправдали деятельности Наполеона) представляют нам историки силы Наполеона ослабевшими в Москве. Он, точно так же, как и прежде, как и после, в 13 м году, употреблял все свое уменье и силы на то, чтобы сделать наилучшее для себя и своей армии. Деятельность Наполеона за это время не менее изумительна, чем в Египте, в Италии, в Австрии и в Пруссии. Мы не знаем верно о том, в какой степени была действительна гениальность Наполеона в Египте, где сорок веков смотрели на его величие, потому что эти все великие подвиги описаны нам только французами. Мы не можем верно судить о его гениальности в Австрии и Пруссии, так как сведения о его деятельности там должны черпать из французских и немецких источников; а непостижимая сдача в плен корпусов без сражений и крепостей без осады должна склонять немцев к признанию гениальности как к единственному объяснению той войны, которая велась в Германии. Но нам признавать его гениальность, чтобы скрыть свой стыд, слава богу, нет причины. Мы заплатили за то, чтоб иметь право просто и прямо смотреть на дело, и мы не уступим этого права.
Деятельность его в Москве так же изумительна и гениальна, как и везде. Приказания за приказаниями и планы за планами исходят из него со времени его вступления в Москву и до выхода из нее. Отсутствие жителей и депутации и самый пожар Москвы не смущают его. Он не упускает из виду ни блага своей армии, ни действий неприятеля, ни блага народов России, ни управления долами Парижа, ни дипломатических соображений о предстоящих условиях мира.


В военном отношении, тотчас по вступлении в Москву, Наполеон строго приказывает генералу Себастиани следить за движениями русской армии, рассылает корпуса по разным дорогам и Мюрату приказывает найти Кутузова. Потом он старательно распоряжается об укреплении Кремля; потом делает гениальный план будущей кампании по всей карте России. В отношении дипломатическом, Наполеон призывает к себе ограбленного и оборванного капитана Яковлева, не знающего, как выбраться из Москвы, подробно излагает ему всю свою политику и свое великодушие и, написав письмо к императору Александру, в котором он считает своим долгом сообщить своему другу и брату, что Растопчин дурно распорядился в Москве, он отправляет Яковлева в Петербург. Изложив так же подробно свои виды и великодушие перед Тутолминым, он и этого старичка отправляет в Петербург для переговоров.
В отношении юридическом, тотчас же после пожаров, велено найти виновных и казнить их. И злодей Растопчин наказан тем, что велено сжечь его дома.
В отношении административном, Москве дарована конституция, учрежден муниципалитет и обнародовано следующее:
«Жители Москвы!
Несчастия ваши жестоки, но его величество император и король хочет прекратить течение оных. Страшные примеры вас научили, каким образом он наказывает непослушание и преступление. Строгие меры взяты, чтобы прекратить беспорядок и возвратить общую безопасность. Отеческая администрация, избранная из самих вас, составлять будет ваш муниципалитет или градское правление. Оное будет пещись об вас, об ваших нуждах, об вашей пользе. Члены оного отличаются красною лентою, которую будут носить через плечо, а градской голова будет иметь сверх оного белый пояс. Но, исключая время должности их, они будут иметь только красную ленту вокруг левой руки.
Городовая полиция учреждена по прежнему положению, а чрез ее деятельность уже лучший существует порядок. Правительство назначило двух генеральных комиссаров, или полицмейстеров, и двадцать комиссаров, или частных приставов, поставленных во всех частях города. Вы их узнаете по белой ленте, которую будут они носить вокруг левой руки. Некоторые церкви разного исповедания открыты, и в них беспрепятственно отправляется божественная служба. Ваши сограждане возвращаются ежедневно в свои жилища, и даны приказы, чтобы они в них находили помощь и покровительство, следуемые несчастию. Сии суть средства, которые правительство употребило, чтобы возвратить порядок и облегчить ваше положение; но, чтобы достигнуть до того, нужно, чтобы вы с ним соединили ваши старания, чтобы забыли, если можно, ваши несчастия, которые претерпели, предались надежде не столь жестокой судьбы, были уверены, что неизбежимая и постыдная смерть ожидает тех, кои дерзнут на ваши особы и оставшиеся ваши имущества, а напоследок и не сомневались, что оные будут сохранены, ибо такая есть воля величайшего и справедливейшего из всех монархов. Солдаты и жители, какой бы вы нации ни были! Восстановите публичное доверие, источник счастия государства, живите, как братья, дайте взаимно друг другу помощь и покровительство, соединитесь, чтоб опровергнуть намерения зломыслящих, повинуйтесь воинским и гражданским начальствам, и скоро ваши слезы течь перестанут».
В отношении продовольствия войска, Наполеон предписал всем войскам поочередно ходить в Москву a la maraude [мародерствовать] для заготовления себе провианта, так, чтобы таким образом армия была обеспечена на будущее время.
В отношении религиозном, Наполеон приказал ramener les popes [привести назад попов] и возобновить служение в церквах.
В торговом отношении и для продовольствия армии было развешено везде следующее:
Провозглашение
«Вы, спокойные московские жители, мастеровые и рабочие люди, которых несчастия удалили из города, и вы, рассеянные земледельцы, которых неосновательный страх еще задерживает в полях, слушайте! Тишина возвращается в сию столицу, и порядок в ней восстановляется. Ваши земляки выходят смело из своих убежищ, видя, что их уважают. Всякое насильствие, учиненное против их и их собственности, немедленно наказывается. Его величество император и король их покровительствует и между вами никого не почитает за своих неприятелей, кроме тех, кои ослушиваются его повелениям. Он хочет прекратить ваши несчастия и возвратить вас вашим дворам и вашим семействам. Соответствуйте ж его благотворительным намерениям и приходите к нам без всякой опасности. Жители! Возвращайтесь с доверием в ваши жилища: вы скоро найдете способы удовлетворить вашим нуждам! Ремесленники и трудолюбивые мастеровые! Приходите обратно к вашим рукодельям: домы, лавки, охранительные караулы вас ожидают, а за вашу работу получите должную вам плату! И вы, наконец, крестьяне, выходите из лесов, где от ужаса скрылись, возвращайтесь без страха в ваши избы, в точном уверении, что найдете защищение. Лабазы учреждены в городе, куда крестьяне могут привозить излишние свои запасы и земельные растения. Правительство приняло следующие меры, чтоб обеспечить им свободную продажу: 1) Считая от сего числа, крестьяне, земледельцы и живущие в окрестностях Москвы могут без всякой опасности привозить в город свои припасы, какого бы роду ни были, в двух назначенных лабазах, то есть на Моховую и в Охотный ряд. 2) Оные продовольствия будут покупаться у них по такой цене, на какую покупатель и продавец согласятся между собою; но если продавец не получит требуемую им справедливую цену, то волен будет повезти их обратно в свою деревню, в чем никто ему ни под каким видом препятствовать не может. 3) Каждое воскресенье и середа назначены еженедельно для больших торговых дней; почему достаточное число войск будет расставлено по вторникам и субботам на всех больших дорогах, в таком расстоянии от города, чтоб защищать те обозы. 4) Таковые ж меры будут взяты, чтоб на возвратном пути крестьянам с их повозками и лошадьми не последовало препятствия. 5) Немедленно средства употреблены будут для восстановления обыкновенных торгов. Жители города и деревень, и вы, работники и мастеровые, какой бы вы нации ни были! Вас взывают исполнять отеческие намерения его величества императора и короля и способствовать с ним к общему благополучию. Несите к его стопам почтение и доверие и не медлите соединиться с нами!»
В отношении поднятия духа войска и народа, беспрестанно делались смотры, раздавались награды. Император разъезжал верхом по улицам и утешал жителей; и, несмотря на всю озабоченность государственными делами, сам посетил учрежденные по его приказанию театры.
В отношении благотворительности, лучшей доблести венценосцев, Наполеон делал тоже все, что от него зависело. На богоугодных заведениях он велел надписать Maison de ma mere [Дом моей матери], соединяя этим актом нежное сыновнее чувство с величием добродетели монарха. Он посетил Воспитательный дом и, дав облобызать свои белые руки спасенным им сиротам, милостиво беседовал с Тутолминым. Потом, по красноречивому изложению Тьера, он велел раздать жалованье своим войскам русскими, сделанными им, фальшивыми деньгами. Relevant l'emploi de ces moyens par un acte digue de lui et de l'armee Francaise, il fit distribuer des secours aux incendies. Mais les vivres etant trop precieux pour etre donnes a des etrangers la plupart ennemis, Napoleon aima mieux leur fournir de l'argent afin qu'ils se fournissent au dehors, et il leur fit distribuer des roubles papiers. [Возвышая употребление этих мер действием, достойным его и французской армии, он приказал раздать пособия погоревшим. Но, так как съестные припасы были слишком дороги для того, чтобы давать их людям чужой земли и по большей части враждебно расположенным, Наполеон счел лучшим дать им денег, чтобы они добывали себе продовольствие на стороне; и он приказал оделять их бумажными рублями.]
В отношении дисциплины армии, беспрестанно выдавались приказы о строгих взысканиях за неисполнение долга службы и о прекращении грабежа.

Х
Но странное дело, все эти распоряжения, заботы и планы, бывшие вовсе не хуже других, издаваемых в подобных же случаях, не затрогивали сущности дела, а, как стрелки циферблата в часах, отделенного от механизма, вертелись произвольно и бесцельно, не захватывая колес.
В военном отношении, гениальный план кампании, про который Тьер говорит; que son genie n'avait jamais rien imagine de plus profond, de plus habile et de plus admirable [гений его никогда не изобретал ничего более глубокого, более искусного и более удивительного] и относительно которого Тьер, вступая в полемику с г м Феном, доказывает, что составление этого гениального плана должно быть отнесено не к 4 му, а к 15 му октября, план этот никогда не был и не мог быть исполнен, потому что ничего не имел близкого к действительности. Укрепление Кремля, для которого надо было срыть la Mosquee [мечеть] (так Наполеон назвал церковь Василия Блаженного), оказалось совершенно бесполезным. Подведение мин под Кремлем только содействовало исполнению желания императора при выходе из Москвы, чтобы Кремль был взорван, то есть чтобы был побит тот пол, о который убился ребенок. Преследование русской армии, которое так озабочивало Наполеона, представило неслыханное явление. Французские военачальники потеряли шестидесятитысячную русскую армию, и только, по словам Тьера, искусству и, кажется, тоже гениальности Мюрата удалось найти, как булавку, эту шестидесятитысячную русскую армию.
В дипломатическом отношении, все доводы Наполеона о своем великодушии и справедливости, и перед Тутолминым, и перед Яковлевым, озабоченным преимущественно приобретением шинели и повозки, оказались бесполезны: Александр не принял этих послов и не отвечал на их посольство.
В отношении юридическом, после казни мнимых поджигателей сгорела другая половина Москвы.
В отношении административном, учреждение муниципалитета не остановило грабежа и принесло только пользу некоторым лицам, участвовавшим в этом муниципалитете и, под предлогом соблюдения порядка, грабившим Москву или сохранявшим свое от грабежа.
В отношении религиозном, так легко устроенное в Египте дело посредством посещения мечети, здесь не принесло никаких результатов. Два или три священника, найденные в Москве, попробовали исполнить волю Наполеона, но одного из них по щекам прибил французский солдат во время службы, а про другого доносил следующее французский чиновник: «Le pretre, que j'avais decouvert et invite a recommencer a dire la messe, a nettoye et ferme l'eglise. Cette nuit on est venu de nouveau enfoncer les portes, casser les cadenas, dechirer les livres et commettre d'autres desordres». [«Священник, которого я нашел и пригласил начать служить обедню, вычистил и запер церковь. В ту же ночь пришли опять ломать двери и замки, рвать книги и производить другие беспорядки».]
В торговом отношении, на провозглашение трудолюбивым ремесленникам и всем крестьянам не последовало никакого ответа. Трудолюбивых ремесленников не было, а крестьяне ловили тех комиссаров, которые слишком далеко заезжали с этим провозглашением, и убивали их.
В отношении увеселений народа и войска театрами, дело точно так же не удалось. Учрежденные в Кремле и в доме Познякова театры тотчас же закрылись, потому что ограбили актрис и актеров.
Благотворительность и та не принесла желаемых результатов. Фальшивые ассигнации и нефальшивые наполняли Москву и не имели цены. Для французов, собиравших добычу, нужно было только золото. Не только фальшивые ассигнации, которые Наполеон так милостиво раздавал несчастным, не имели цены, но серебро отдавалось ниже своей стоимости за золото.
Но самое поразительное явление недействительности высших распоряжений в то время было старание Наполеона остановить грабежи и восстановить дисциплину.
Вот что доносили чины армии.
«Грабежи продолжаются в городе, несмотря на повеление прекратить их. Порядок еще не восстановлен, и нет ни одного купца, отправляющего торговлю законным образом. Только маркитанты позволяют себе продавать, да и то награбленные вещи».
«La partie de mon arrondissement continue a etre en proie au pillage des soldats du 3 corps, qui, non contents d'arracher aux malheureux refugies dans des souterrains le peu qui leur reste, ont meme la ferocite de les blesser a coups de sabre, comme j'en ai vu plusieurs exemples».
«Rien de nouveau outre que les soldats se permettent de voler et de piller. Le 9 octobre».
«Le vol et le pillage continuent. Il y a une bande de voleurs dans notre district qu'il faudra faire arreter par de fortes gardes. Le 11 octobre».
[«Часть моего округа продолжает подвергаться грабежу солдат 3 го корпуса, которые не довольствуются тем, что отнимают скудное достояние несчастных жителей, попрятавшихся в подвалы, но еще и с жестокостию наносят им раны саблями, как я сам много раз видел».
«Ничего нового, только что солдаты позволяют себе грабить и воровать. 9 октября».
«Воровство и грабеж продолжаются. Существует шайка воров в нашем участке, которую надо будет остановить сильными мерами. 11 октября».]
«Император чрезвычайно недоволен, что, несмотря на строгие повеления остановить грабеж, только и видны отряды гвардейских мародеров, возвращающиеся в Кремль. В старой гвардии беспорядки и грабеж сильнее, нежели когда либо, возобновились вчера, в последнюю ночь и сегодня. С соболезнованием видит император, что отборные солдаты, назначенные охранять его особу, долженствующие подавать пример подчиненности, до такой степени простирают ослушание, что разбивают погреба и магазины, заготовленные для армии. Другие унизились до того, что не слушали часовых и караульных офицеров, ругали их и били».
«Le grand marechal du palais se plaint vivement, – писал губернатор, – que malgre les defenses reiterees, les soldats continuent a faire leurs besoins dans toutes les cours et meme jusque sous les fenetres de l'Empereur».
[«Обер церемониймейстер дворца сильно жалуется на то, что, несмотря на все запрещения, солдаты продолжают ходить на час во всех дворах и даже под окнами императора».]
Войско это, как распущенное стадо, топча под ногами тот корм, который мог бы спасти его от голодной смерти, распадалось и гибло с каждым днем лишнего пребывания в Москве.
Но оно не двигалось.
Оно побежало только тогда, когда его вдруг охватил панический страх, произведенный перехватами обозов по Смоленской дороге и Тарутинским сражением. Это же самое известие о Тарутинском сражении, неожиданно на смотру полученное Наполеоном, вызвало в нем желание наказать русских, как говорит Тьер, и он отдал приказание о выступлении, которого требовало все войско.
Убегая из Москвы, люди этого войска захватили с собой все, что было награблено. Наполеон тоже увозил с собой свой собственный tresor [сокровище]. Увидав обоз, загромождавший армию. Наполеон ужаснулся (как говорит Тьер). Но он, с своей опытностью войны, не велел сжечь всо лишние повозки, как он это сделал с повозками маршала, подходя к Москве, но он посмотрел на эти коляски и кареты, в которых ехали солдаты, и сказал, что это очень хорошо, что экипажи эти употребятся для провианта, больных и раненых.
Положение всего войска было подобно положению раненого животного, чувствующего свою погибель и не знающего, что оно делает. Изучать искусные маневры Наполеона и его войска и его цели со времени вступления в Москву и до уничтожения этого войска – все равно, что изучать значение предсмертных прыжков и судорог смертельно раненного животного. Очень часто раненое животное, заслышав шорох, бросается на выстрел на охотника, бежит вперед, назад и само ускоряет свой конец. То же самое делал Наполеон под давлением всего его войска. Шорох Тарутинского сражения спугнул зверя, и он бросился вперед на выстрел, добежал до охотника, вернулся назад, опять вперед, опять назад и, наконец, как всякий зверь, побежал назад, по самому невыгодному, опасному пути, но по знакомому, старому следу.
Наполеон, представляющийся нам руководителем всего этого движения (как диким представлялась фигура, вырезанная на носу корабля, силою, руководящею корабль), Наполеон во все это время своей деятельности был подобен ребенку, который, держась за тесемочки, привязанные внутри кареты, воображает, что он правит.


6 го октября, рано утром, Пьер вышел из балагана и, вернувшись назад, остановился у двери, играя с длинной, на коротких кривых ножках, лиловой собачонкой, вертевшейся около него. Собачонка эта жила у них в балагане, ночуя с Каратаевым, но иногда ходила куда то в город и опять возвращалась. Она, вероятно, никогда никому не принадлежала, и теперь она была ничья и не имела никакого названия. Французы звали ее Азор, солдат сказочник звал ее Фемгалкой, Каратаев и другие звали ее Серый, иногда Вислый. Непринадлежание ее никому и отсутствие имени и даже породы, даже определенного цвета, казалось, нисколько не затрудняло лиловую собачонку. Пушной хвост панашем твердо и кругло стоял кверху, кривые ноги служили ей так хорошо, что часто она, как бы пренебрегая употреблением всех четырех ног, поднимала грациозно одну заднюю и очень ловко и скоро бежала на трех лапах. Все для нее было предметом удовольствия. То, взвизгивая от радости, она валялась на спине, то грелась на солнце с задумчивым и значительным видом, то резвилась, играя с щепкой или соломинкой.


Источник — «http://wiki-org.ru/wiki/index.php?title=Аденоассоциированный_вирус&oldid=79542249»